A legfontosabb különbség a crRNS tracrRNS és a gRNS között az, hogy a crRNS a CRISPR két RNS-típusának egyike, amely komplementer a cél DNS-szekvenciával, míg a tracrRNS a CRISPR második RNS-típusa, amely a Cas-nukleázt és a gRNS-t kötő váz egyike a CRISPR-Cas9 baktériumok és archaeák rendszerének két fő összetevőjének, amely felismeri a cél DNS-t és irányítja a Cas-fehérjéket, hogy kettős szálú töréseket hozzanak létre a cél-DNS-ben.
A CRISPR a fürtözött, szabályos, rövid palindromikus ismétlődéseket jelenti. Ez a baktériumok és archaeák egyik immunrendszere. A baktériumok és az archaeák ezt a rendszert használják arra, hogy megvédjék magukat a vírusos kórokozóktól. Ez az egyik legcsodálatosabb mechanizmus, amely magában foglalja a sikeres genetikai módosítást. Ezt a mechanizmust (CRISPR-Cas9) új génszerkesztő eszközként használják a biotechnológiában. Új eredményeket hozott a biotechnológiában, különösen a géntechnológia területén.
A CRISPR-Cas9 rendszernek két fő összetevője van. Ezek irányító RNS (gRNS) és CRISPR-asszociált (Cas) nukleázok. Az irányító RNS egy specifikus RNS-szekvencia, amely a Cas-fehérjéket a cél-DNS hasítására irányítja. Az útmutató RNS kétféle RNS-ből áll. Ezek crispr RNS (crRNS) és tracrRNS. A CRISPR-asszociált (Cas) nukleázok nem specifikus endonukleázok, amelyek kettős száltörést okoznak a cél DNS-ben. Azáltal, hogy a cél-DNS-ben kettős szálú töréseket hoznak létre, a baktériumok és archaeák endogén javító mechanizmusaikat a vírus DNS inaktiválására irányítják.
Mi az a crRNA?
A crRNS vagy Crispr RNS a vezető RNS két típusának egyike. Szerkezetileg egy 17-20 nukleotidból álló szekvencia. A crRNS legértékesebb tulajdonsága, hogy komplementer a cél DNS-sel. Ezért a crRNS megegyezik a vírus DNS-szekvenciájával. A CRISPR-Cas 9 rendszer specifitása a crRNS-től függ. Baktériumokban a crRNS a tracrRNS-szekvenciához fuzionálva létezik, amely a CRISPR RNS második típusa. A crRNS termelést a baktériumok vírussal való ismételt érintkezése váltja ki. Amikor exponáljuk, a crRNS-t kódoló gén transzkripciója megy végbe. Ezután beindul a védekező mechanizmus a vírus ellen.
01. ábra: CRISPR-Cas9 rendszer
Mi az a tracrRNA?
A transzaktiváló crRNS vagy tracrRNS a guideRNS vagy CRISPR RNS második része. Nyomkövető RNS-nek ejtik. A tracrRNS az endonukleáz Cas 9 fehérje kötővázaként szolgál. Más szavakkal, a tracrRNS fogantyúként működik, amely a Cas9-et a cél DNS felé irányítja. Szerkezetileg a tracrRNS 42 nukleotidból áll. A crRNS-sel kombinálva létezik.
Mi az a gRNA?
Az útmutató RNS vagy gRNS a CRISPR-Cas9 immunrendszer két fő összetevőjének egyike. Ez egy specifikus RNS-szekvencia, amely két elemből áll: a crRNS-ből és a tracrRNS-ből. A gRNS felismeri a cél-DNS-t, és irányítja a Cas-fehérjéket, hogy kettős szálú töréseket hozzanak létre a cél-DNS-ben. Ennek érdekében a crRNS a cél DNS egy komplementer szekvenciájából áll, míg a tracrRNS a fogantyúként működő Cas fehérjéket irányítja.
02. ábra: gRNA
A megfelelő gRNS megtervezése kritikus lépés a CRISPR-Cas9 génszerkesztő eszközben. Ezért a CRISPR rendszer sikere és szerkesztési hatékonysága a gRNS helyes szekvenciájától függ. A gRNS expresszálható a transzfektált plazmidból származó sejtekben. Amikor klónozott plazmidokat juttatunk a sejtekbe, a gazdasejtek gRNS-t termelnek. A leggyakrabban generált gRNS 100 bázispárból áll.
Mi a hasonlóság a crRNS tracrRNS és a gRNS között?
- crRNS, tracrRNS és gRNS olyan RNS-szekvenciák, amelyek baktériumokban és archaeában találhatók.
- Mind a CRISPR rendszerhez tartoznak.
- gRNS crRNS-ből és tracrRNS-ből készül.
- Részesek a bakteriofág DNS felismerésében és az endonukleázok cél-DNS felé irányításában.
- Ennélfogva mindhárom RNS-típus részt vesz a Cas9 nukleáz irányításában, hogy kettős szálú töréseket hozzon létre a behatoló idegen genetikai anyagokban.
- A CRISPR-kísérlet sikere mindhárom RNS-típustól függ.
Mi a különbség a crRNS tracrRNS és a gRNS között?
A crRNS a CRISPR gRNS-ének egy része, amely komplementer a cél-DNS-sel, míg a tracrRNS a gRNS második része, amely a Cas-nukleáz kötővázaként szolgál. A gRNS a crRNS és a tracrRNS kombinációja, és egyike a CRISPR-Cas9 rendszer két összetevőjének, amely felismeri a cél-DNS-t és irányítja a nukleázokat, hogy kettős szálú töréseket hozzanak létre a cél-DNS-ben. Tehát ez a legfontosabb különbség a crRNS tracrRNS és a gRNS között.
A következő táblázat összefoglalja a crRNS tracrRNS és a gRNS közötti különbséget.
Összefoglaló – crRNS vs tracrRNA vs gRNA
A CRISPR-Cas9 rendszer baktériumok és archaeák immunrendszere. Ezt a rendszert génszerkesztő eszközként használják a biotechnológiában. A CRISPR kétféle RNS-ből áll, nevezetesen a CRISPR RNS-ből (crRNS) és a transzaktiváló CRISPR RNS-ből (tracrRNS). Összefoglaló néven útmutatóRNS vagy gRNS. Ez az RNS felismeri a behatoló kórokozók célszekvenciáit, és irányítja az endonukleázokat, hogy kettős szálú töréseket hozzanak létre a cél DNS-ben. Amint az idegen genetikai anyagban kettős szál szakadás történik, az endogén javító mechanizmus (nem homológ végcsatlakozás; NHEJ) mutációk beiktatásával inaktiválja az idegen DNS-t. Így ez összefoglalja a crRNS tracrRNS és a gRNS közötti különbséget.
