A legfontosabb különbség a GFP és az EGFP között az, hogy a GFP egy vad típusú fehérje, amely nem emlős sejtek molekuláris klónozásába épül be, míg az EGFP a GFP továbbfejlesztett vagy módosított típusa, amely emlőssejteken használható..
A molekuláris klónozás egy fejlett technika, amelyet a tudósok óriási mértékben alkalmaznak a fehérjék rekombináns technológiával történő expresszálására. A rekombináns DNS-technológiában szükséges a rekombináns vektor sikeres transzformálása gazdaszervezetbe. Ezért a transzformációs folyamat során azonosítani kell és meg kell erősíteni, hogy a kérdéses gén átalakult-e a gazdaszervezetbe vagy sem. Ennek felmérésére a molekuláris biológusok számos technikát alkalmaznak. Ezen technikák közül az egyik a riportergén. Ezek a riportergének szelektálható markerekként működnek a megfelelő transzformánsok kiválasztásához. Így a Green Fluorescent Protein (GFP) és az Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP) két riporter fehérje, amelyet a molekuláris klónozásban használnak.
Mi az a GFP?
A GFP egy vad típusú fehérje, amely 238 aminosavat tartalmaz, és számos aminosavszekvencia szelekciós régiót tartalmaz, amelyek megkülönböztetik a többi fluoreszcens fehérjétől. Továbbá ez a vad típusú fehérje eredetileg az Aequorea Victoria-ból izolálva volt; a medúza egy fajtája. Természeti jelenségek esetén azonban a medúza bizonyos ingerekre reagálva képes volt zöld színű fluoreszcenciát produkálni.
Korábban ez a koncepció meglepte a tudósokat, és úgy döntöttek, hogy felhasználják a rekombináns DNS-technológiáikban. Következésképpen a tudósok a vad típusú génnek ezt a mutáns formáját használták riportergénként génexpressziós vizsgálataik során. A GFP vad típusú génje képes olyan fehérjét termelni, amely szobahőmérsékleten vagy UV fényben fluoreszcenciát ad. Ezért a transzformánsokba beépítve fluoreszcenciát fejez ki és termel. Ha a fluoreszcencia a transzformációs folyamat után következik be, az megerősíti a transzformációs folyamat sikerességét. Egyszerű szavakkal, a fluoreszcencia emisszió jelzi a kívánt gént hordozó vektor sikeres átalakulását a gazdaszervezetbe.
01. ábra: GFP
Ezért a GFP a génexpresszió in vivo markereként működik. Jelenleg géntechnológiai technikákat alkalmaznak a GFP előállítására. Ezenkívül a GFP számos továbbfejlesztett változata, például az EGFP is elérhető. Így ez lehetővé teszi a GFP hatékony felhasználását molekuláris klónozási és génexpressziós vizsgálatokban.
Mi az EGFP?
Az Enhanced Green Fluorescent Protein vagy EGFP a GFP továbbfejlesztett változata. Egyszerű szavakkal, az EGFP-t a vad típusú GFP tervezett változataként határozhatjuk meg. Amikor a GFP vad típusú génje mutálódik, jótékony hatásokat fejt ki. Így a GFP mutált génje lehetővé teszi új karakterek kifejezését, és ennek eredményeként javított tulajdonságokkal rendelkező Enhanced GFP-t állíthatunk elő. Ezen túlmenően, besugárzással vagy kémiai módszerekkel sikeresen mutációkat vihetünk be a vad típusú GFP génbe. Ezek a mutáns gének termelik az EGFP-t, amely előnyösebb tulajdonságokkal rendelkezik.
02. ábra: EGFP
Az EGFP továbbfejlesztett jellemzői a következők;
- Erősebb fluoreszcens jeleket képes kibocsátani.
- Nagy érzékenységgel rendelkezik.
- Emlőssejteken használható prokarióták és más alacsonyabb szintű eukarióták helyett.
- Emellett a termék fokozott tisztaságát is biztosítja.
Ezért a GFP-vel összehasonlítva az EGFP a preferált választás a génexpressziós vizsgálatokhoz. A termék azonban drágább a GFP-hez képest.
Mi a hasonlóság a GFP és az EGFP között?
- A GFP és az EGFP két fehérje, amelyek zöld színt bocsátanak ki
- Ezért mindkettő riporterfehérjeként működik a génexpressziós vizsgálatokban.
- Ezenkívül lehetséges mindkettő szintetizálása rekombináns DNS-technológiával.
- Sőt, könnyű tovább mutálni ezt a két típust a továbbfejlesztett formák szintéziséhez.
Mi a különbség a GFP és az EGFP között?
A riportergén egy olyan gén, amely a rekombináns DNS-technológiában érdekelt génhez kapcsolódik. A rekombináns vektor sikeres transzformációját jelzi a gazdaszervezetnek. Itt a GFP és az EGFP kétféle zöld fluoreszcens fehérje, amelyek riporterfehérjeként működnek. A GFP és az EGFP közötti legfontosabb különbség azonban az, hogy a GFP vad típusú, míg az EGFP a GFP tervezett változata. Ezenkívül az EGFP előnyösebb tulajdonságokkal rendelkezik, mint a GFP. Például az EGFP erősebb fluoreszkáló fényt állít elő, és érzékenyebb, mint a GFP. A másik különbség a GFP és az EGFP között az, hogy milyen rendszerekben tudjuk ezeket használni. A nem emlős rendszerek GFP-t használnak, míg az emlős rendszerek az EGFP-t.
Az alábbi infografika táblázatos formában mutatja be a GFP és az EGFP közötti különbséget.
Összefoglaló – GFP vs EGFP
A A GFP és az EGFP riporterfehérjék a molekuláris klónozási és génexpressziós vizsgálatokban. A GFP a vad típusú fehérje, amely egy zöld fluoreszcens fehérje. A fehérjét kezdetben az Aequorea victoria medúzától izolálták. Ezzel szemben az EFGP a GFP fehérje fokozott formája. Ez egy vad típusú mutáns, javított tulajdonságokkal. Ezért az EFGP nagyobb jelerősséggel és nagyobb érzékenységgel rendelkezik. Ezért emlős vektorokon is használhatjuk. Ezzel szemben a GFP-t főleg nem emlős vektorokon alkalmazzák. Összességében ez a különbség a GFP és az EGFP között.
