A legfontosabb különbség a szacharóz gradiens és a szacharóz párnás ultracentrifugálás között az, hogy a szacharóz gradiens ultracentrifugálásnál folyamatos szacharóz gradienst használnak, míg a szacharóz párnás ultracentrifugálásnál nem folytonos szacharóz gradienst.
A szacharóz gradiens és a szacharózpárnás ultracentrifugálás két hasonló típusú technikát használnak bizonyos típusú makromolekulák elkülönítésére. Mindkét technikánál szacharózsűrűségi gradienst alkalmaznak. A szacharóz gradiens ultracentrifugálásnál azonban folyamatos sűrűséggradienst, míg a szacharózpárnás ultracentrifugálásnál nem folytonos sűrűséggradienst használnak.
Mi az a szacharóz gradiens ultracentrifugálás?
A szacharóz gradiens ultracentrifugálás olyan technika, amely makromolekulák, például DNS, RNS és fehérjék frakcionálására használható. Ennek a technikának több lépése van. Ezek szacharóz gradiens előkészítése, centrifugálás, elválasztás és elúció. A gradiens előkészítése a legfontosabb lépés ebben a technikában. Ennél a technikánál a különböző méretű makromolekulákat tartalmazó mintát egy szacharóz gradiens oszlop felületére rétegelik. Centrifugáláskor a különböző méretű makromolekulák különböző sebességgel ülepednek át a szacharóz gradiens oszlopon. Az ülepedés számos tényezőtől függ, beleértve a centrifugálási erőt, a méret alakját és a makromolekulák sűrűségét, a gradiens sűrűségét és viszkozitását. A centrifugálás végén a makromolekulákat a sűrűség szerint térben elválasztják. A nagyobb makromolekulák (nagy sűrűségű makromolekulák) a fenék felé ülepednek. A könnyebbek (alacsony sűrűségű makromolekulák) a gradiens tetején maradnak. Ezért a molekulák különböző sávokként válnak el egymástól. Ezután el kell választani a sávokat, és meg kell tisztítani az adott makromolekulát a szacharóztól.
01. ábra: Szacharóz gradiens ultracentrifugálás
Az alkalmazási oldalon ezt a módszert széles körben használják DNS-molekulák frakcionálására. A szacharóz gradiens ultracentrifugálást általában a fehérjekomplex méretének és összetételének jellemzésére használják. Ezenkívül ezt a technikát az mRNS részleges tisztítására használják.
Mi az a szacharózpárna ultracentrifugálás?
A szacharózpárnás ultracentrifugálás egy másik technika, amely lehetővé teszi a makromolekulák frakcionálását. A szacharózsűrűség-gradiens ultracentrifugálásával ellentétben a szacharózpárnás ultracentrifugálás nem folytonos sűrűséggradienst használ. A szacharóz koncentrációja felülről lefelé növekszik diszkrét lépésekben. Ennél a technikánál az elválasztást úgy érik el, hogy a tisztított kivonatot egy kis mennyiségű szacharózoldat tetejére helyezik egy centrifugacsőben, az úgynevezett szacharózpárnában. Ez lehetővé teszi a jobb elválasztást nagy sebességű centrifugálásnál. Amikor a molekulák sávként válnak el a szacharózpárna között, a fehér sáv összegyűjthető és megtisztítható. Ezenkívül a szennyeződéseket szacharózpárna módszerrel tovább lehet eltávolítani. A szacharózpárna módszer lehetővé teszi, hogy a cső 60-70%-át megtöltsék a mintával. Ezért a szacharózpárna módszer nagyobb mennyiségű minta feldolgozását teszi lehetővé.
Mi a hasonlóság a szacharózgradiens és a szacharózpárnás ultracentrifugálás között?
- A szacharóz gradiens és a szacharózpárnás ultracentrifugálás két olyan technika, amelyet makromolekulák keverékének elválasztására használnak.
- Mindkét módszerben szacharóz gradienst használunk.
- A centrifugálás mindkét módszer egyik lépése.
- A molekulák mindegyik módszerben sávként vagy zónaként ülepednek.
Mi a különbség a szacharózgradiens és a szacharózpárnás ultracentrifugálás között?
A szacharóz gradiens ultracentrifugálás egy olyan technika, amely folyamatos szacharóz gradienst használ a centrifugacsőben, míg a szacharóz párnás ultracentrifugálás egy nem folyamatos szacharóz gradienst használó technika. Így ez a legfontosabb különbség a szacharóz gradiens és a szacharózpárnás ultracentrifugálás között.
Sőt, a szacharózpárnás ultracentrifugálás nagyobb mennyiségű minta feldolgozását teszi lehetővé, míg a szacharóz gradiens ultracentrifugálás viszonylag kis mennyiségű mintát tesz lehetővé.
Az alábbi infografika további különbségeket mutat be a szacharóz gradiens és a szacharózpárnás ultracentrifugálás között.
Összefoglaló – Szacharóz gradiens vs szacharózpárna ultracentrifugálás
Szacharóz gradiens ultracentrifugálás választja el a makromolekulákat folyamatos szacharóz gradiens segítségével. Ezzel szemben a szacharózpárnás ultracentrifugálás nem folytonos szacharózgradienst használ a keverékben lévő meghatározott típusú részecskék elválasztására. Tehát ez a legfontosabb különbség a szacharóz gradiens és a szacharózpárnás ultracentrifugálás között. A szacharózpárna módszer lehetővé teszi a morfológiailag ép részecskék összegyűjtését, mivel nem okoz mechanikai feszültséget, ellentétben a szacharóz gradiens ultracentrifugálással, amely a cső aljára zúzza a molekulákat. Ezenkívül a szacharózpárnás ultracentrifugálás nagyobb mennyiségű minta feldolgozását teszi lehetővé, mint a szacharóz gradiens ultracentrifugálás.
