Kiemelt különbség – Gélelektroforézis és SDS oldal
A gélelektroforézis egy olyan technika, amely a makromolekulákat elektromos térben választja szét. A molekuláris biológiában elterjedt módszer a DNS, RNS és fehérjék elválasztására a keverékekből molekulaméretük szerint. Az SDS Page a gélelektroforézis egy fajtája, amellyel a fehérjéket méretük alapján választják el a fehérjekeveréktől. A gélelektroforézis kifejezés a DNS, RNS és fehérje elválasztására alkalmazott normál technikára utal, míg az SDS Page a gélelektroforézis egyik típusa. Ez a legfontosabb különbség a gélelektroforézis és az SDS Page között.
Mi az a gélelektroforézis?
A gélelektroforézis egy gyakori technika, amelyet a laboratóriumokban használnak töltött molekulák, például DNS, RNS, fehérjék stb. elválasztására keverékeikből. A gélelektroforézisben gélt használnak. Molekulaszűrőként működik. A gélelektroforézisben kétféle gélt használnak, nevezetesen az agarózt és a poliakrilamidot. A gél és a gélkészítmény kiválasztása fontos tényező, amelyet figyelembe kell venni a gélelektroforéziseknél, mivel a gél pórusméretét gondosan kell manipulálni a molekulák gélelektroforézissel történő jó elválasztása érdekében. A gélelektroforézisnél a gél két végéhez elektromos mező kapcsolódik. A gél egyik vége pozitív, míg a másik vége negatív töltésű.
A DNS és az RNS negatív töltésű molekulák. Miután a gél negatív végéről a gélbe kerülnek, és az elektromos térre kerülnek, a gél pórusain keresztül a gél pozitív töltésű vége felé vándorolnak. A migráció sebessége a töltéstől és a molekula méretétől függ. A kisebb molekulák könnyen átvándorolnak a gél pórusain, mint a nagyobb molekulák. Ezért a kisebb molekulák nagy távolságot tesznek meg a gélen, a nagyobb molekulák pedig rövid utat. A molekulák gélen való mozgásának megfigyelésére speciális színezékeket használnak. Az elektromos mezőt egy bizonyos ideig alkalmazzák és leállítják, hogy megakadályozzák a molekulák elvesztését és a molekulák mozgási pozíciójukban maradjanak. A gélben különböző sávok figyelhetők meg. Ezek a sávok különböző méretű molekulákat képviselnek. Ezért a gélelektroforézis hasznos a molekulák méretük szerinti megkülönböztetésére.
A gélelektroforézist a molekuláris biológia preparatív technikáiként beépítik különböző technikákba, mint például a PCR, RFLP, klónozás, DNS-szekvenálás, Southern-blot, genomtérképezés stb.
01. ábra: Agaróz gél elektroforézis
Mi az az SDS-oldal?
A nátrium-dodecil-szulfát-poliakrilamid gélelektroforézis (SDS oldal) a gélelektroforézis egyik fajtája, amelyet fehérjék elválasztására használnak. Ha gélelektroforézist használnak a fehérjék szétválasztására, speciális kezelésekre van szükség, mivel a fehérjék nincsenek negatív töltésűek, mint a DNS és az RNS, és nem vándorolnak a pozitív vagy negatív vég felé. Ezért a fehérjék denaturálódnak, és negatív töltéssel vonják be a gélelektroforézis előtt. Ez nátrium-dodecil-szulfát (SDS) nevű mosószerrel történik. A gélelektroforézis, amely SDS-t és poliakrilamid gélt használ hordozó közegként, SDS Page néven ismert. Ezt a technikát gyakran használják a biokémiában, a genetikában, a törvényszéki orvostudományban és a molekuláris biológiában.
Az SDS oldal során a fehérjék SDS-sel keverednek. Az SDS a fehérjéket lineáris alakra bontja ki, és molekulatömegükkel arányos negatív töltéssel vonja be őket. A negatív töltés miatt a fehérjemolekulák a gél pozitív töltésű vége felé vándorolnak, és molekulatömegüknek megfelelően szétválnak. Az SDS oldalon poliakrilamidot használnak a gél szilárd hordozójaként. A fehérjék tényleges szétválása elsősorban a gél tulajdonságaitól függ. Ezért a poliakrilamid gél előkészítését gondosan kell elvégezni, és megfelelő koncentrációjú poliakrilamidot kell használni. A poliakrilamid gélek nagyobb felbontást mutatnak, mint az agaróz gélek. Ezért az SDS Page nagy felbontású fehérjeleválasztási technikának számít.
SDS Page a denaturáló gélelektroforézis egyik fajtája. Ennek jelentős korlátai vannak a fehérjeanalízisben. Mivel az SDS denaturálja a fehérjéket az elválasztás előtt, nem teszi lehetővé az enzimaktivitás, a fehérjekötési kölcsönhatások, a fehérje kofaktorok stb. kimutatását.
02. ábra: SDS oldal
Mi a különbség a gélelektroforézis és az SDS-oldal között?
Gélelektroforézis kontra SDS oldal |
|
| A gélelektroforézis egy olyan módszer, amelyet a makromolekulák elektromos térrel történő szétválasztására végeznek. | Az SDS Page egy nagy felbontású gélelektroforézis technika, amelyet a fehérjék tömegük alapján történő szétválasztására használnak. |
| Gel Run | |
| Vízszintesen vagy függőlegesen is végrehajtható. | SDS oldal mindig függőlegesen fut. |
| A szétválás alapja | |
| A szétválasztás a töltés és a méret szerint történik. | A fehérjék szétválása a tömeg és a töltés függvényében megy végbe. |
| Felbontás | |
| Az agaróz gélelektroforézis kis felbontású, a poliakrilamid gélelektroforézis pedig nagyobb felbontású | SDS oldal jobb felbontású. |
| Denaturáció | |
| A gélelektroforézis denaturáló és nem denaturáló technikákat egyaránt tartalmaz. | SDS oldal denaturálja a fehérjéket az elválasztás előtt. |
Összefoglaló – Gélelektroforézis kontra SDS oldal
A gélelektroforézis egy elterjedt technika, amelyet DNS, RNS és fehérjék méretük és töltésük alapján történő elválasztására és elemzésére használnak. A gélelektroforézisnek két fő típusa van, nevezetesen az agaróz gélelektroforézis és a poliakrilamid gélelektroforézis. Az agaróz géleket főként nukleinsav-leválasztásra használják; ha nagyobb felbontásra van szükség, poliakrilamid géleket használnak. Az SDS Page egy olyan típusú gélelektroforézis, amelyet általában fehérjék összetett keverékeinek szétválasztására használnak. Nagy felbontású fehérjeleválasztási technikának tekintik. Ez a különbség a gélelektroforézis és az SDS-oldal között.
