Fő különbség – meleg vs hideg tripszinezés
A meleg és hideg tripszinezés két módszer, amelyet a sejtek enzimatikus lebontására használnak állati sejttenyésztés során. A meleg és hideg tripszinezés közötti kulcsfontosságú különbség, amint azt a nevek is sugallják, attól függ, hogy milyen hőmérsékleten adják hozzá a tripszint a sejtbontáshoz. A meleg tripszinezés magasabb hőmérsékleti körülmények között (36,5–37 0C), míg a hideg tripszinezés alacsony hőmérsékleten megy végbe.
Az állati sejtek elsődleges sejttenyésztésének folyamata során három fő módszert alkalmaznak, amelyek sikeresnek bizonyultak. A három módszer magában foglalja a sejtek mechanikai szétbontását, a sejtek enzimatikus dezaggregációját és az elsődleges explantációs technikát. A sejtek enzimatikus lebontása, ami a sejtek izolálásához vezet, és ezt a tripszin fehérjebontó enzim végzi. Ezért ezt a folyamatot tripszinezésnek nevezik. A tripszinezés két különböző körülmény között végezhető, nevezetesen meleg tripszinezéssel és hideg tripszinezéssel. A meleg tripszinezés a sejtek tripszinnel való kezelésének módszere, meleg körülmények között, 36,5-37 0C hőmérsékleten. A hideg tripszinezés a tripszin kezelés folyamata, amely hidegebb körülmények között, lehetőleg jégben, nagyon alacsony hőmérsékleten megy végbe.
Mi az a meleg tripszinezés?
A tripszinezés elvégezhető a sejtkomponensek szétszedésére, hogy a sejteket izolálhassák, hogy elsődleges sejttenyészetet állítsanak elő. A tripszin egy fehérjebontó enzim, és a tripszinezéshez használt enzimkeverék lehet nyers kivonat vagy tisztított termék. A nyers kivonatról azt mondják, hogy hatékonyabb a fehérjelízisben és a sejtbontásban, mivel más lebontó enzimeket is tartalmaz.
A meleg tripszinezés a leggyakrabban használt enzimes módszer a sejtbontásra, amely magasabb hőmérsékleti körülmények között megy végbe. A tripszinezéssel végzett kezelés előtt a kívánt szövetet kisebb darabokra vágják. Megkönnyíti az egyszerű szétbontási folyamatot. A feldarabolt szövetet ezután egy speciális, Dissection Basal S alt táptalajban mossák.
A mosási lépés befejeztével a sejteket az aktív enzimet, azaz a tripszint tartalmazó lombikba transzformálják. Mivel ez a technika meleg tripszinezési protokollt jelent, a tripszint körülbelül 37 0C hőmérsékletre helyezzük körülbelül négy órára.
01. ábra: Tripszin
A tartalmat centrifugálási módszerekkel összekeverik és felrázzák a protokoll megkönnyítése és a szétesési folyamat felgyorsítása érdekében. Az ajánlott idő elérése után a sejtek származhatnak a felülúszóból. A felülúszóból származó sejteket ezután meghatározott hőmérsékleten és időben inkubáljuk.
Mi az a hideg tripszinezés?
A hideg tripszinezés a másik típusú tripszinezés, amely hideg körülmények között megy végbe. Ennél a technikánál az apróra vágott és megmosott sejteket fiolákba helyezik jégre, majd tripszinnel áztatják. Az áztatás időtartama sokkal hosszabb – körülbelül 6-24 óra.
Az áztatási eljárás befejezése után a tripszint eltávolítjuk a sejtlizátumból, és a szövetdarabokat tovább inkubáljuk 37 0C-on körülbelül 20-30 percig. A sejtek szétesését a szövetkeverék ismételt pipettázásával idézzük elő. Ez lehetővé teszi, hogy a sejtek disszociálódjanak a membránról, és a felülúszóba kerüljenek. Miután a sejtek a felülúszóban vannak, inkubálják és a kívánt hőmérsékleten és időtartamon tenyésztik őket.
A hideg tripszinezési módszernek számos előnye van
- Nagyobb az életképes sejtek hozama, mivel a sejtkárosodás minimális. A sejtkárosodás minimálisra csökken, ha nem használunk centrifugálási lépéseket.
- Nagyon kényelmes módszer.
- Kevésbé fáradságos.
A hideg tripszinezési módszer fő korlátja, hogy nagy mennyiségeket nem lehet egyszerre használni.
Mi a hasonlóság a meleg és a hideg tripszinezés között?
- Mind a meleg, mind a hideg tripszinezési folyamatok a tripszin enzimet használják a sejtek lebontására.
- Mind a meleg, mind a hideg tripszinezési eljárásokat alkalmazzák a sejttenyésztési eljárásokban a sejtek szétbontására.
- Mind a meleg, mind a hideg tripszinezéses kezelési eljárások során a sejtek a felülúszóból származnak.
Mi a különbség a meleg és a hideg tripszinezés között?
Meleg vs hideg tripszinezés |
|
| A meleg tripszinezés a sejtek tripszinnel való kezelésének módszere, meleg körülmények között, 36,5–37 °C hőmérsékleten 0. | A hideg tripszinezés a tripszin kezelés folyamata, amely hidegebb körülmények között, lehetőleg jégben, nagyon alacsony hőmérsékleten megy végbe. |
| Protokoll | |
| A feldarabolt szövetdarabokat az eljárás során folyamatosan 37 0C-on tartják. | A feldarabolt szövetdarabokat kezdetben jéghideg hőmérsékleten, majd 37 °C-on tartják 0. |
| Hőmérséklet | |
| Meleg tripszinezés 36,5-37 között történik 0 | A hideg tripszinezés jéghideg hőmérsékleten megy végbe. |
| Időigény | |
| Kevesebb idő szükséges a meleg tripszinezés teljes folyamatához (körülbelül 4 óra). | Hosszabb idő szükséges (körülbelül 6–24 óra) a hideg tripszinezéshez. |
| Az életképes sejtek hozama | |
| Kevés a meleg tripszinezésben. | Magas a hideg tripszinezés. |
| Centrifugálás használata | |
| A meleg tripszinezés során a sejtek széteséséhez centrifugálásra van szükség. | Hideg tripszinezésnél nincs szükség centrifugálásra. |
| Kiinduló szövetmennyiség a tripszinezéshez | |
| Nagyobb mennyiségű szövet használható meleg tripszinezéshez. | Kisebb mennyiségű szövet használható hideg tripszinezéshez. |
| Sejtkárosodás | |
| Magas a meleg tripszinezésben végzett centrifugálás miatt. | Kevesebb a hideg tripszinezés miatt. |
Összefoglaló – meleg vs hideg tripszinezés
A tripszinezés a fehérjebontó tripszin enzim felhasználásának módja a primer sejttenyészetek lebontására és előkészítésére a sejttenyésztési folyamat során. A tripszinezésnek két fő technikája létezik, amelyek az eljárás során alkalmazott hőmérsékleten alapulnak. Meleg és hideg tripszinezéssel rendelkeznek. A meleg tripszinezést 37 0C-on, míg a hideg tripszinezést jéghideg körülmények között hajtjuk végre. Habár a hideg tripszinezés hosszabb időt vesz igénybe, állítólag magasabb az életképes sejtek hozama. Ez annak a ténynek köszönhető, hogy a sejtkárosodás minimálisra csökken a hideg tripszinezés során, mivel nem alkalmaz erőteljes centrifugálási lépéseket. Ez a különbség a meleg és a hideg tripszinezés között.
