Fontos különbség – vízszintes és függőleges gélelektroforézis
A gélelektroforézis egy laboratóriumi technika, amelyet a genetikában használnak a DNS-t, RNS-t és más fehérjéket tartalmazó keverékek töltésük és molekulaméretük szerinti szétválasztására. Az ebben a módszerben elválasztandó DNS-t, RNS-t vagy fehérjéket kis pórusokat tartalmazó gélen vezetik át. A molekulákat elektromos tér vezeti át a gélen. A molekulák áthaladnak a gél pórusain, és a mozgás sebessége fordítottan arányos a megfelelő hosszukkal. Ezért az alacsonyabb molekulaméretű molekulák gyorsabban mozognak, mint a nagyobb molekulatömegűek. Az elektromos mezőt a gél két végén lévő töltéskülönbség hozza létre. Az egyik vége pozitív, a másik vége negatív töltést tartalmaz. Mivel a DNS- és RNS-molekulák negatív töltésűek, a gél pozitív töltésű vége felé vonzódnak. A gélelektroforézis két különböző módszerből állhat: vízszintes gélelektroforézis és függőleges gélelektroforézis. A vízszintes gélelektroforézis során a gél vízszintes helyzetben van jelen, és egy folyamatos futópufferbe merül, amely magában a géldobozban van jelen. A függőleges gélelektroforézis során a pufferrendszer függőlegesen van orientálva, és nem folytonos, két kamra van a tetején és az alsó részen egy katóddal és egy anóddal. Ez a legfontosabb különbség a vízszintes és a függőleges gélelektroforézis között.
Mi az a vízszintes gélelektroforézis?
A vízszintes gélelektroforézis a DNS-, RNS- vagy fehérjemolekulák molekulaméretük és töltésük szerinti elválasztására vonatkozó alapelméletet használja. Ennél a technikánál a gél vízszintes helyzetben van, és egy folyamatos pufferbe merül. Agaróz gélt használnak a géldoboz két rekeszre való szétválasztására. A géldoboz egyik vége anódot, míg a másik végén katódot tartalmaz. Amikor áramot alkalmaznak, az ebben a technikában használt puffer lehetővé teszi töltésgradiens létrehozását. A töltés alkalmazásakor a gél hajlamos felmelegedni. A puffer hűtőfolyadékként is működik, amely optimális szinten tartja a hőmérsékletet. A futópuffer recirkulációja megakadályozza a pH-gradiens kialakulását. A vízszintes gélelektroforézisben nem lehet nem folytonos pufferrendszert alkalmazni, mivel a gélrendszer két rekeze össze van kötve a futópufferrel. Az akrilamidot gélelektroforézis során használják a fehérjekeverékek szétválasztására.
01. ábra: Vízszintes gélelektroforézis
A vízszintes gélelektroforézis során az akrilamid nem használható, mivel a géldoboz oxigénnek van kitéve. Az oxigén jelenléte miatt az akrilamid polimerizációja gátolt, és ez megzavarja a gél képződését. A vízszintes gélelektroforézis egy egyszerű módszer, amelyet a DNS és az RNS szétválasztására használnak.
Mi az a függőleges gélelektroforézis?
A függőleges gélelektroforézis technika a gélelektroforézis elsődleges elmélete szerint működik, de összetettebbnek tartják, mint a horizontális gélelektroforézis módszert. Ez a technika nem folytonos puffert használ. A felső kamrában egy katód, az alsó kamrában pedig az anód található. Az egyes rekeszekben található elektródák biztosítják a szükséges elektromos mezőt. A két szerelt üveglap közé vékony réteg gélt öntünk. Ezért a gél felső része a felső kamrába, a gél alsó része pedig az alsó kamrába merül. Az áram alkalmazása után a puffer kis része az alsó kamrába kerül a felső kamrából a gélen keresztül. Az ebben a technikában alkalmazott áram perc egységekből áll.
02. ábra: Függőleges gélelektroforézis
A függőleges gélelektroforézis során a puffer csak a gélen áramlik át. Ez lehetővé teszi a feszültség gradiens pontos szabályozását az elválasztási szakaszban. Akrilamid gél használható, mivel a rekeszek nincsenek kitéve a légköri oxigénnek. Az akrilamid gél kisebb pórusmérete miatt a pontos elválasztás nagyobb felbontással érhető el.
Mi a hasonlóság a vízszintes és a függőleges gélelektroforézis között?
- Mindkét rendszer a gélelektroforézis alapelmélete szerint működik.
- Anódot és katódot használnak a szükséges elektromos tér biztosítására mindkét rendszerben.
Mi a különbség a vízszintes és a függőleges gélelektroforézis között?
Vízszintes vs függőleges gélelektroforézis |
|
| A vízszintes gélelektroforézis egy gélelektroforézis technika, amelyben a gél vízszintes helyzetben van jelen. | A függőleges gélelektroforézis egy gélelektroforézis technika, amelyben a gélt függőlegesen állítják be. |
| Puffer | |
| A vízszintes gélelektroforézis folyamatos pufferből áll. | A futópuffer nem folyamatos a függőleges gélelektroforézis során. |
| Akrilamid használata | |
| Az akrilamid nem használható vízszintes gélelektroforézishez, mivel a géldoboz légköri oxigén hatásának van kitéve. | Mivel a gélt két különálló kamra miatt nem éri a légköri oxigén, az akrilamid felhasználható függőleges gélelektroforézishez. |
| Funkció | |
| A vízszintes gélelektroforézist gyakrabban használják DNS- és RNS-keverékek, de nem fehérjék szétválasztására. | Függőleges gélelektroforézist használnak a fehérjekeverékek szétválasztására. |
Összefoglaló – Vízszintes vs függőleges gélelektroforézis
A gélelektroforézis olyan laboratóriumi technika, amelyet széles körben alkalmaznak DNS-, RNS- és fehérjemolekulákat tartalmazó keverékek szétválasztására. A gélelektroforézisnek két módja van: vízszintes és függőleges gélelektroforézis. Vízszintes gélelektroforézisben a futópuffer folyamatos, míg a függőleges gélelektroforézisben nem folytonos. Ez a különbség a vízszintes és a függőleges gélelektroforézis között. Mindkét rendszer a gélelektroforézis közös elve szerint működik.
A vízszintes és függőleges gélelektroforézis PDF-verziójának letöltése
Letöltheti ennek a cikknek a PDF-verzióját, és offline célokra használhatja az idézet jegyzetének megfelelően. Kérjük, töltse le a PDF verziót innen: Különbség a vízszintes és a függőleges gélelektroforézis között.
