Átalakulás vs transzfekció
A transzformáció és a transzfekció két egyszerű technika, amellyel idegen gént juttatnak be a gazdasejtbe. Ezek a technikák azonban a gazda- vagy vektorrendszer típusától függenek.
Mi az a sejttranszformáció?
A transzformáció a gének élesztő- és baktériumsejtekbe történő bejuttatására alkalmazott technika. Ez a technika általában öröklődő változásokat okoz a génekben, így a gén expressziója állandó. A bakteriális transzformációt először 1928-ban Frederick Griffith vezette be. Aztán az 1970-es évek elején ezt a technikát használták az E.coli. Az E. coli transzformációs folyamata során a sejteket jéghideg CaCl-oldatba áztatjuk2 Ez a lépés az E. coli sejteket kompetenssé teszi. Ezt követően a kompetens sejteket összekeverjük a plazmid DNS-sel, és jégen inkubáljuk 20-30 percig. Ezután rövid hősokkot adnak, hogy lehetővé tegyék a DNS átvitelét a sejtbe. Végül a sejteket táplevesbe helyezzük, és 37 °C-on 60-90 percig inkubáljuk a plazmidok létrehozása érdekében. Ha ezek a lépések sikeresen befejeződtek, a transzformált sejteket megfelelő táptalajra helyezhetjük a sejtek szaporítására. Mivel a transzformáció nem hatékony technika, nem használható klónbankok készítésére.
Mi az a sejttranszfekció?
A transzfekció egy idegen gén emlőssejtekbe történő bejuttatásának módja. A transzfekciónak két módja van; nevezetesen tranziens transzfekció és stabil transzfekció. Átmeneti transzfekció esetén a génexpresszió korlátozott ideig áll rendelkezésre; így a gén megváltozása átmeneti expressziót okoz. Ez a transzfekciós módszer egyszerű és gyors; ezért rutinszerűen használható. Az átmeneti transzfekció egyik hátránya a nagy léptékű fehérjeszintézis rendszerek alkalmazásának nehézsége.
A stabil transzfekció során egy célgén beépül a gazdasejt genomjába, így a génexpresszió állandó, ellentétben az átmeneti transzfekcióval.
Mi a különbség az átalakítás és a transzfekció között?
• A transzformáció egy gén bevitele egy prokarióta sejtbe (baktérium és élesztő), míg a transzfekciót általában egy gén emlőssejtekbe történő bejuttatásának nevezik.
• Az átalakulás örökölhető változást eredményez a génekben, míg a transzfekció akár átmeneti expressziót, akár tartós változásokat eredményezhet a génekben.
