A fő különbség a kolorimetriás és a fluorometrikus vizsgálat között az, hogy a kolorimetriás assay meghatározza a színes vegyületek koncentrációját az oldatban, míg a fluorometrikus vizsgálat az oldat kinetikai mechanizmusát.
A biokémiai vizsgálat egy olyan technika, amely egy biológiai molekula vagy anyag aktivitását analitikusan detektálja vagy mennyiségileg meghatározza. Ez egy in vitro folyamat. A kolorimetriás assay és a fluorometric assay a laboratóriumokban végzett általános biokémiai vizsgálatok két típusa. Számos módszer, mint például az ELISA és a Western-blot, szintén összetett biokémiai vizsgálatok a metabolikus aktivitás mennyiségi meghatározására és a biomolekulák, például fehérjék, enzimek és más kis molekulák funkcionális viselkedésének mérésére. Az ilyen típusú vizsgálatokat a fehérje-DNS, fehérje-RNS és fehérje-fehérje kölcsönhatások azonosítására használják.
Mi az a kolorimetriás vizsgálat?
A kolorimetriás vizsgálat egy olyan technika, amely meghatározza a színes vegyületek koncentrációját az oldatban. Más szavakkal, a kolorimetriás vizsgálat olyan reakció, amely a reagensek és az analitok közötti enzimatikus vagy kémiai reakció következtében színváltozáshoz vezet. A kolorimetriás vizsgálatokat a biokémiában alkalmazzák az enzimek, specifikus vegyületek, hormonok, antitestek és más analitok tesztelésére. Kolorimétereket vagy spektrofotométereket használnak. A koloriméterek olyan eszközök, amelyek a színes mintákat jellemzik a színjellemzők objektív mérése érdekében. A spektrofotométer egy olyan eszköz, amely a fény intenzitását a fény színének vagy hullámhosszának függvényében méri.
01. ábra: Kolorimetriás vizsgálat
Hogyan működik a kolorimetriás vizsgálat?
A kolorimetriás vizsgálat során egy lemezt készítenek egy adott antitesttel a lyukakhoz kötve. Ezután hozzáadjuk a mintát. Ez lehetővé teheti, hogy a minta kötődjön az antitesthez. Ezután egy kimutatási antitestet és egy szubsztrátot adunk a lyukakba, hogy reagáljanak a detektáló próbával. A leolvasás előtti végén adjuk hozzá a stopoldatot. A vaknak nevezett üres lyuk a minta nélkül marad. A kolorimetriás vizsgálatban minél sötétebb a szín, annál nagyobb az analit koncentrációja. Általában csak egy hullámhosszra van szükség a leolvasáshoz. De ha van referenciamérés, akkor két vagy több hullámhosszt használnak.
Mi az a fluorometrikus vizsgálat?
A fluorometrikus vizsgálat egy olyan technika, amely meghatározza az enzimreakciók kinetikai mechanizmusát. A fluorometriás vizsgálat során fluoreszcens terméket állítanak elő nem fluoreszcens szubsztrátból, vagy fordítva. Ez a vizsgálat a fluoreszcencia rezonancia energiatranszfert (FRET) is használja, ahol az enzimatikus reakció megváltoztatja két fluorofor helyzetét a szubsztrátban, így megváltozik a fluoreszcencia intenzitása.
02. ábra: Fluorometrikus vizsgálat
A fluorometrikus vizsgálatok általában sokkal érzékenyebbek, mint a többi teszt. A betegek szövet-, sejt- vagy folyadékmintáiban a diagnosztikai enzimbecslések megnövekednek a nagyobb érzékenység miatt.
Hogyan működik a fluorometrikus vizsgálat?
A fluorometriás vizsgálat során szubsztrátot adnak a lemezen lévő mintához, és a fluoreszcencia választ a lemezleolvasóval mérik. Itt minden cellát külön mérnek. A fluorometriás vizsgálatokban átlátszatlan lemezeket használnak. Ez csökkenti a fényszóródást. Az ilyen típusú vizsgálathoz két hullámhosszra van szükség. Az egyik hullámhossz a gerjesztés érzékelésére szolgál, a másik a kibocsátás.
Mi a hasonlóság a kolorimetriás és a fluorometrikus vizsgálat között?
- A kolorimetriás assay és a fluorometric assay a biokémiai vizsgálatok két típusa.
- Mindkét vizsgálatot orvosi diagnosztika céljából végeznek.
- Ezek a vizsgálatok enzimatikus reakciót tartalmaznak.
- Mindkét vizsgálat szubsztrátot és analitokat tartalmaz.
Mi a különbség a kolorimetriás és a fluorometrikus vizsgálat között?
A kolorimetriás vizsgálat egy olyan technika, amely meghatározza a színes vegyületek koncentrációját az oldatban, míg a fluorometrikus vizsgálat az enzimreakciók kinetikai mechanizmusát határozza meg. Tehát ez a legfontosabb különbség a kolorimetriás és a fluorometrikus vizsgálat között. Ezenkívül a fluorometrikus vizsgálatok érzékenyebbek, mint a kolorimetriás vizsgálatok; így a fluorometrikus vizsgálatok több analit kimutatására is képesek. Így ez egy másik fontos különbség a kolorimetriás és a fluorometrikus assay között. Ezenkívül a fluorometrikus vizsgálatokhoz két hullámhosszra van szükség, míg a kolorimetriás vizsgálatokhoz egy hullámhosszra van szükség.
Az alábbi infografika további különbségeket mutat be a kolorimetriás és fluorometrikus assay között.
Összefoglaló – Kolorimetriás vs fluorometrikus vizsgálat
A biokémiai vizsgálat egy analitikai eljárás, amelyet a sejtmetabolikus reakciók meghatározására és számszerűsítésére használnak. A kolorimetriás assay és a fluorometric assay a biokémiai vizsgálatok két típusa. A kolorimetriás vizsgálat olyan reakció, amely a reagensek és az analitok közötti enzimatikus vagy kémiai reakció miatt színváltozáshoz vezet, míg a fluorometrikus vizsgálat az enzimreakciók kinetikai mechanizmusának meghatározására szolgáló technika. Mindkét vizsgálati eljárás egy szubsztrátot és egy analitot magában foglaló enzimreakciótól függ. A fluorometrikus vizsgálatok érzékenyebbek, mint a kolorimetriás vizsgálatok. A legfontosabb, hogy a fluorometrikus vizsgálatokhoz két hullámhosszra van szükség, míg a kolorimetriás vizsgálatokhoz csak egy hullámhosszra van szükség. Így ez összefoglalja a kolorimetriás és fluorometrikus vizsgálat közötti különbséget.
