A gélszűrés és az affinitáskromatográfia közötti fő különbség az, hogy a gélszűréses kromatográfia a vizsgálandó minta molekulatömegének vagy méretének különbségeitől függ, míg az affinitáskromatográfia az analit egy rögzített ligandumhoz való affinitásától függ.
A kromatográfia kifejezés az analitikai kémiában a keverék komponenseinek különböző technikák alkalmazásával történő elválasztására utal. A kromatográfia egy gyűjtőnév, amely számos különböző elválasztási módszert jelöl.
Mi az a gélszűrős kromatográfia?
A gélszűrős kromatográfia olyan analitikai technika, amelyben a komponensek elválasztása a molekulatömeg vagy méret különbségétől függ. Ezt a technikát méretkizárásos kromatográfiának vagy molekulaszita kromatográfiának is nevezik. Az elválasztási technika ebben a folyamatban a mintában lévő molekulák eltérő képességétől függ, hogy bejussanak a gélszűrő közeg pórusaiba.
A gélszűrési technikában az állófázis hidratált, szivacsszerű anyagból készült gyöngyöket tartalmaz, amelyek molekulaméretű pórusai szűk méretűek. Ha egy különböző méretű molekulákból álló vizes oldatot átengedünk egy oszlopon, amely ezeket a „molekularitákat” tartalmazza, akkor a szűrőközeg pórusainál nagyobb molekulák gyorsan áthaladnak az oszlopon. Ezzel szemben a kisebb molekulák bejutnak a gél pórusaiba, és hajlamosak lassan mozogni az oszlopon. A molekulák a molekulaméret csökkenésének sorrendjében eluálódnak az oszlopról. Itt a gél kizárási határa azoknak a legkisebb molekuláknak a molekulatömege, amelyek nem képesek áthatolni egy adott gél pórusain.
Különböző típusú gélszűrési technikák léteznek, például közvetett gélszűrési módszer, steady-state gélszűrés, gélgyöngy-dialízis stb. A közvetett gélszűrős kromatográfia hasznos a szabad pajzsmirigyhormonok meghatározásában. A steady-state gélszűrős kromatográfia egy közvetett technika, amely leginkább szabad szteroidok, például kortizol, tesztoszteron stb. mérésére használható. A gélgyöngy dialízis ezzel szemben az egyensúlyi állapotú gélszűrés egy viszonylag egyszerűbb módosítása.
Mi az affinitáskromatográfia?
Az affinitáskromatográfia egy analitikai technika és egy elválasztási módszer, amely az immobilizált ligandum és kötőpartnere közötti specifikus kötési kölcsönhatástól függ. Néhány példa az antitest-antigén-kötés, az enzim-szubsztrát-kötés és az enzim-inhibitor-kötés. Ezért ennek a technikának számos fontos alkalmazása van a nukleinsav-tisztításban, a fehérjetisztításban sejtkivonatokból és a vérből történő tisztításban.
Ennél a technikánál a legfontosabb tulajdonság a ligandum immobilizálása. Ehhez különféle anyagokat használhatunk, például akrilátokat és szilikagélt. Fontos megakadályozni, hogy a célmolekula sztérikus interferenciát okozzon a ligandumnak. Ezenkívül a szilárd fázishoz inhibitor kapcsolódik. Ezt az inhibitort távtartónak nevezzük. Klasszikusan a távtartó egy szénhidrogén láncból áll.
Az affinitáskromatográfia állófázisa tartalmazza a magot, a távtartót és a ligandumot. Néha egy fémiont is tartalmaz, amely a ligandumhoz kapcsolódik. Ennél a technikánál a legelőnyösebb szilárd fázis az állófázishoz az agarózgél, mivel könnyen adagolható, és tetszőleges méretű gyantaágyakkal megtölthető és megtölthető az oszlop, és elég nagy ahhoz, hogy a biomolekulák szabadon áramolhassanak a gyöngyökbe és azokon keresztül. A ligandumok kovalensen kapcsolódhatnak a gyöngypolimerhez különféle módokon. A leggyakoribb spacer vegyületek a ciano-bromid, az epoxid, az epoxid C6 savval és a diamin. Másrészt az általunk használható ligandum a célponttól függően eltérő, például antitest-antigén, vas- vagy alumíniumionok-foszfoproteinek, avidin-biotin, glutation-GST, kelátképző-His-címkézett fehérjék stb.
Mi a különbség a gélszűrés és az affinitáskromatográfia között?
A kromatográfia fontos analitikai technika. A gélszűrős kromatográfia és az affinitáskromatográfia a kromatográfia két fontos változata. A fő különbség a gélszűrés és az affinitáskromatográfia között az, hogy a gélszűréses kromatográfia az analitminta molekulatömegének vagy méretének különbségeitől függ, míg az affinitáskromatográfia egy analitnak az immobilizált ligandumhoz való affinitásától függ.
Összefoglaló – Gélszűrés vs affinitáskromatográfia
Különböző típusú kromatográfiás technikák léteznek az alkalmazásuktól és a vizsgálandó minta természetétől függően. A gélszűrés és az affinitáskromatográfia két ilyen technika. A fő különbség a gélszűrés és az affinitáskromatográfia között az, hogy a gélszűrős kromatográfia a vizsgálandó minta molekulatömegének vagy méretének különbségeitől függ, míg az affinitáskromatográfia az analit egy rögzített ligandumhoz való affinitásától függ.
