A fő különbség a Coomassie és az ezüstfestés között az, hogy a coomassie festés egy fehérjefestési technika, amely coomassie briliánskék festést használ, míg a szálfestés egy fehérjefestési technika, amely ezüstfestést használ.
A fehérje szétválasztása és azonosítása a proteomanalízis kritikus lépései. Gélelektroforézis után nagy felbontású fehérje jellemzésre van szükségük. Számos festési technika létezik, amelyek különböző foltokat tartalmaznak, mint például anionos festékek (coomassie briliánskék), fémkationok (imidazol-cink), ezüstfestés és fluoreszcens festékek stb. Néha radioaktív szondák is használhatók. A festési technika megválasztása az egyszerűségtől, a laboratóriumban rendelkezésre álló képalkotó berendezésektől stb. függ.
Mi az a Coomassie-festés?
A Coomassie festés egy fehérjefestési technika, amely coomassie briliánskék festést használ. Általában coomassie blue technikának hívják. A Coomassie briliánskék a legnépszerűbb anionos fehérjefesték. Ez a festés normál körülmények között szinte minden fehérjét megfest, jó kvantitatív linearitással közepes érzékenység mellett. A Coomassie briliánskék festés nem specifikusan kötődik szinte minden fehérjéhez. Két különböző coomassie briliánskék pácváltozat létezik: R-250 és G-250. Az R-250 rövidebb festési időt kínál, míg a G-250 érzékenyebb és környezetbarátabb készítményekben is elérhető.
01. ábra: Coomassie-festés
A Coomassie festékek nagyon népszerűek a tömegspektrometriás vizsgálatokban és a fehérjeazonosítási vizsgálatokban. Ezenkívül a biológiailag biztonságos coomassie folt a coomassie blue G-250 nem veszélyes készítménye, amely jelenleg elérhető a piacon. Ennek a készítménynek az az előnye, hogy az öblítéshez és a színtelenítéshez csak víz szükséges. A biológiailag biztonságos coomassie festés a hagyományos coomassie blue G-250-gyel egyenértékű érzékenységet kínál, de jobb, mint az R-250 coomassie pácolt. Ezenkívül egyszerűbb és gyorsabb festési protokollal rendelkezik, mint a hagyományos Coomassie blue G-250. A coomassie blue festés hátránya, hogy kevésbé érzékeny az ezüstfestéshez képest. A Coomassie-kék festés körülbelül 50-szer kevésbé érzékeny, mint az ezüstfestés. Kötési egyszerűsége miatt azonban számos tanulmányban előnyben részesítik.
Mi az ezüstfestés?
Az ezüstfestés egy fehérjefestési technika, amely ezüstfestést használ. Az ezüstfestést agaróz és poliakrilamid gélek festésére egyaránt használják. A fehérje ezüstfestését agaróz gélekben először Kerényi és Gallyás fejlesztette ki 1973-ban. Később az SDS-PAGE-ban használt poliakrilamid gélekben lévő fehérjékhez adaptálták. Jelenleg az ezüstfestést DNS vagy RNS festésére is használják. A gélek festése érdekében a géleket ebben a módszerben ezüst-nitrát oldattal inkubáljuk. Az ezüstfestés barnától feketéig festi azokat a helyeket, ahol a fehérjék jelen vannak.
02. ábra: Ezüstfoltozás
Az ezüstfestés intenzitása a fehérje elsődleges szerkezetétől függ. Sőt, a használt edények tisztasága és a reagensek tisztasága is befolyásolhatja az ezüstfestés minőségét. Az ezüstfestés hátránya azonban, hogy nem képes minden fehérjét kimutatni, különösen a glikoproteineket és az oldalláncukhoz nagy módosított csoportokat tartalmazó fehérjéket.
Mi a hasonlóság a Coomassie és az ezüstfestés között?
- A Coomassie- és az ezüstfestés a fehérjefestésben használt két technika.
- A fehérjéket és a DNS-t is megfesthetik.
- Mindkét festési technikának vannak hátrányai.
- Ezek a technikák hasonló lépéseket tartalmaznak, mint például a rögzítés, a festés és a színtelenítés.
Mi a különbség a Coomassie és az ezüstfestés között?
A Coomassie festés egy fehérjefestési technika, amely coomassie briliánskék festést használ, míg a szálfestés egy fehérjefestési technika, amely ezüstfestést használ. Így ez a legfontosabb különbség a Coomassie és az ezüstfestés között. Ezenkívül a Coomassie-festés kevésbé érzékeny, mint az ezüstfestés.
Az alábbi infografika táblázatos formában sorolja fel a Coomassie- és az ezüstfestés közötti különbségeket egymás melletti összehasonlítás céljából.
Összefoglaló – Coomassie vs ezüstfestés
A fehérjék megjelenítéséhez fehérje-specifikus festékmegkötő vagy színképző kémiai reakciót lehet végrehajtani. Ezt fehérjefestésnek nevezik. A Coomassie és az ezüstfestés a fehérjefestéshez használt két technika. A Coomassie festési technika coomassie briliánskék foltot, míg a szálfestés ezüstfoltot használ. Tehát ez a legfontosabb különbség a Coomassie és az ezüstfestés között.
