A direkt és a közvetett immunfluoreszcencia közötti fő különbség az, hogy a direkt immunfluoreszcencia egyetlen antitestet használ, amely a kérdéses célpont ellen dolgozik, míg a közvetett immunfluoreszcencia két antitestet használ a kérdéses célpont megjelölésére.
Az immunfluoreszcencia vagy sejtképalkotás egy olyan technika, amelyet egy adott célantigén fluoroforral történő megjelölésére használnak. Itt a fluorofor egy fluoreszkáló kémiai vegyület, amely fénygerjesztésre képes újra fényt bocsátani. Amikor egy fluorofor kötődik a célantigénhez, lehetővé teszi a célmolekula kimutatását a mintában. További leírásként, amikor egy antigén kötődik egy specifikus antitesthez, konjugálható fluoroforokkal. Ezért könnyű kimutatni a célantigén jelenlétét a mintában, ha fluoreszcens mikroszkóp alatt megfigyeljük.
Emellett az immunfluoreszcenciának két típusa van; direkt és indirekt immunfluoreszcencia. A direkt és indirekt immunfluoreszcencia közötti különbség elsősorban a felhasznált antitestek számában és a fluorofor konjugációban rejlik. Ez azt jelenti, hogy direkt immunfluoreszcenciában a fluorofor közvetlenül az elsődleges antitesttel, míg indirekt immunfluoreszcenciában a fluorofor a másodlagos antitesttel konjugálódik.
Mi az a közvetlen immunfluoreszcencia?
Az immunfluoreszcencia antitesteket használ a specifikus célantigének kimutatására. A közvetlen immunfluoreszcencia az immunfluoreszcencia két típusának egyike. A közvetlen immunfluoreszcenciában egyetlen antitest (elsődleges antitest) vesz részt, és a fluorofor közvetlenül konjugál az elsődleges antitesttel. Az antitestnek a célantigénhez való kötésekor a fluorofor fluoreszcenciát bocsát ki, amely fluoreszcens mikroszkóppal kimutatható.
01. ábra: Közvetlen immunfluoreszcencia
A közvetlen immunfluoreszcencia azonban drága módszer, mivel az elsődleges konjugált antitestek költségesek a másodlagos antitestekhez képest. Ennek ellenére ez nem tartalmaz további lépést, tehát egy rövidebb technikát. Ezenkívül a nem specifikus kötődések csökkennek a közvetlen immunfluoreszcenciában. Ezért a fajok keresztreaktivitása alacsony. De a detektálás során a direkt immunfluoreszcencia érzékenysége gyenge a közvetett immunfluoreszcenciához képest.
Mi az indirekt immunfluoreszcencia?
Az indirekt immunfluoreszcencia az immunfluoreszcencia második típusa, amely kétféle antitestet, például primer és másodlagos antitesteket foglal magában a célantigén jelölésében. Ebben a módszerben a fluorofor konjugál a másodlagos antitesttel. Ezért ez a technika egy további lépést tartalmaz.
02. ábra: Immunfluoreszcencia
A módszer érzékenysége azonban nagy, mivel több fluorofor is konjugálható másodlagos antitestekhez, és ez megkönnyíti a detektálást. Ezenkívül az indirekt immunfluoreszcencia olcsóbb, mivel a másodlagos antitestek konjugálása olcsóbb és egyszerűbb. A direkt immunfluoreszcenciához képest a fajok keresztreaktivitása magas az indirekt módszerrel.
Mi a hasonlóság a közvetlen és a közvetett immunfluoreszcencia között?
- Ez kétféle immunfluoreszcens technika.
- Az elsődleges antitestek és a fluorofor mindkét módszerben részt vesznek.
- Az antigén-antitest reakció is mindkét módszernél előfordul.
- Továbbá mind a közvetlen, mind a közvetett immunfluoreszcencia fluoreszcens mikroszkópot használ az antigén kimutatására.
Mi a különbség a közvetlen és közvetett immunfluoreszcencia között?
Az immunfluoreszcencia lehet közvetlen vagy közvetett a használt antitestekkel való fluorofor konjugáció alapján. Közvetlen immunfluoreszcenciában a fluorofor konjugál az elsődleges antitesttel, amely az egyetlen ellenanyag, amely ebben a technikában részt vesz. Ezzel ellentétben az indirekt immunfluoreszcenciában a fluorofor konjugál a másodlagos antitesttel, amely a technika által érintett két típusú antitest egyike. Ezért a fő különbség a közvetlen és a közvetett immunfluoreszcencia között a fluoroforral konjugált antitesttípus.
A következő infografika a közvetlen és a közvetett immunfluoreszcencia közötti különbségek egymás melletti összehasonlítását mutatja be.
Összefoglaló – Közvetlen kontra közvetett immunfluoreszcencia
Az immunfluoreszcencia egy olyan technika, amelyet specifikus antigének jelenlétének kimutatására használnak a mintában. Ez a technika specifikus antitesteket használ. Ezért ebben az antitestek fluoroforokkal konjugálnak, hogy fluoreszcens mikroszkóppal kimutatják azokat. Ezenkívül az immunfluoreszcenciának két típusa van, nevezetesen a direkt és indirekt immunfluoreszcencia. A közvetlen immunfluoreszcencia egyetlen ellenanyagot és ehhez az antitesthez közvetlenül konjugált fluorofort foglal magában. Az indirekt immunfluoreszcencia két antitestet foglal magában; primer és szekunder, valamint a másodlagos antitesthez konjugált fluorofor. Mivel számos másodlagos antitest kötődhet egy primer antitesthez, és több fluorofor is konjugálhat másodlagos antitestekkel, az indirekt immunfluoreszcencia érzékenyebb módszer, mint a direkt módszer. Ezenkívül az indirekt módszer olcsóbb, mint a direkt módszer. Tehát ez a különbség a direkt és a közvetett immunfluoreszcencia között.
