Kulcskülönbség – Forward vs Reverse Primer
A polimeráz láncreakció (PCR) egy DNS-amplifikációs módszer, amelyet molekuláris biológiai alkalmazásokban használnak. Ez egy általánosan használt technika, amely millió-milliárd másolatot készít egy különösen érdekelt DNS-szekvenciáról. Ez egy laboratóriumban végzett in vitro módszer. A PCR technika teljes mértékben a kereskedelmi forgalomban előállított Taq polimeráztól függ. Ezenkívül számos más alkatrészt és megfelelő hőmérséklet-tartást igényel. Az egyik fontos összetevő az alapozók. A primerek azok a rövid DNS-szekvenciák, amelyeket kifejezetten a cél DNS-szekvenciához terveztek. Általában körülbelül 20 nukleotid hosszúak. A Taq polimeráz katalizálja a nukleotidok hozzáadását a már meglévő nukleotidszekvenciához. Ezért a primerek az új szálak szintézisének kiindulópontjaiként szolgálnak. A Taq polimeráz csak 5'-3' irányban működik, így a DNS-szintézis ugyanabban az 5'-3' irányban megy végbe. Mivel a DNS kétszálú, a PCR-ben kétféle primerre van szükség. Forward primer és reverse primer néven ismertek. A forward és reverse primerek elnevezése a DNS-ben lévő primer megnyúlásának iránya alapján történik, amikor a DNS-szintézis megtörténik. A forward primer összekapcsolódik az antiszensz DNS-szállal, és elindítja a gén +ve szálának szintézisét 5'-3' irányban. A reverz primer összekapcsolódik a szensz szálal, és elindítja a kódoló szál komplementer szálának szintézisét; amely –ve a gén szála 5’-3’ irányba. Ez a legfontosabb különbség az előre és a fordított primerek között.
Mi az a Forward Primer?
Az előre irányultság egy gén kódoló szálának vagy szenz szálának szintézise. A Taq polimeráz egy új szál szintézisét katalizálja 5’-3’ irányban. A kódoló szál szintézise akkor következik be, amikor a primer összekapcsolódik a nem kódoló vagy az antiszensz szállal, és 5'-3' irányban megnyúlik.
01. ábra: Forward és Reverse alapozók
Az antiszensz szálhoz vagy a nem kódoló szálhoz vagy a templát szálhoz kapcsolódó primert forward primernek nevezik, mivel a forward primer a gén kódoló vagy pozitív szálának szintézisének kiindulópontjaként működik. A forward primernek van egy rövid nukleotidszekvenciája, amely komplementer az antiszensz szál 3' határoló végével. Hibridizálódik az antiszensz szálal, és megkönnyíti a Taq polimerázt, hogy olyan nukleotidokat adjon hozzá, amelyek komplementerek a templátszálhoz.
Mi az a fordított alapozó?
A fordított primer egy rövid DNS-szekvencia, amely összekapcsolódik a szenzorszál vagy a kódoló szál 3'-végével. A reverz primer kiindulási pontként szolgál a kódoló szekvencia vagy a nem kódoló szekvencia komplementer szálának szintetizálásához. A fordított primer a kódoló szál 3’-es végéhez illeszkedik. Ennélfogva összekapcsolódik a kódoló szál határoló 3' végével, és lehetővé teszi a Taq polimeráz számára, hogy szintetizálja az antiszensz szálat vagy a templátszálat. Mivel az orientációja fordított, ez a primer fordított alapozóként van megjelölve.
Mind a fordított, mind a forward primerek fontosak a célzott vagy érdekelt DNS-régiók millió-milliárd kópiáinak előállításához.
Mi a hasonlóság az előre és a fordított alapozó között?
- Mind a Forward, mind a Reverse primerek oligonukleotidokból készülnek.
- Mind az előre, mind a fordított láncindítók rövid nukleotidszekvenciájúak, amelyek komplementerek a DNS kettős szálak határoló végeivel.
- Mind a Forward, mind a Reverse primerek általában 20 nukleotidból állnak.
- Az előre és a fordított primereket egyaránt használják polimeráz láncreakciókban.
- Mind az előre, mind a fordított alapozókat kereskedelmi forgalomban szintetizálják.
- Mind a Forward, mind a Reverse primerek hőmérsékletstabilak, és általában hasonló Tm-jük van.
- Mind az előre, mind a fordított láncindítók össze vannak kapcsolva a cél DNS-szekvenciákkal.
- Mind az előre, mind a fordított primert a PCR-reakcióknak megfelelően tervezték.
- Mind az előre, mind a fordított primerek szolgálnak kiindulópontként a DNS-amplifikációhoz.
- Mind a fordított, mind a forward primerek fontosak a megcélzott vagy érdekelt DNS-szekvenciák bizonyos régióinak millió másolatának előállításához.
Mi a különbség a Forward és Reverse Primer között?
Forward Primer vs Reverse Primer |
|
| Forward primer egy rövid DNS-szekvencia, amely hibridizálódik a gén nem kódoló vagy templátszálának 3' végével, és kiindulási pontként szolgál a kódoló szekvencia szintetizálásához. | A fordított primer egy rövid DNS-szekvencia, amely hibridizálódik a kódoló vagy a nem templát szál 3' végével, és kiindulási pontként szolgál a nem kódoló szekvencia szintetizálásához. |
| Lágyító szál | |
| Előre primer lágyítás sablonszálral. | Reverse primer lágyítás a nem sablon szálal. |
| Új sorozat eredménye | |
| Forward primer megkönnyíti a kódoló szekvencia szintézisét. | A fordított primer megkönnyíti a nem kódoló szekvencia szintézisét. |
Összefoglaló – Előre és fordított alapozó
A PCR-technikában kétféle primer szerepel. Ezek előre és fordított alapozók. Az új DNS-szál szintézisében a primer megnyúlása alapján ezeket a primereket jelölik vagy nevezik el. A Taq polimeráz 5’-3’ orientációban szintetizálja az új DNS-t. Ezért az alapozókat úgy tervezték, hogy kiegészítsék a kettős szál 3’-es végét. Az 5'-3' irányban megnyúló előremenő primer az antiszensz vagy a templát vagy a nem kódoló szekvencia 3' végével hibridizál. Kiindulási pontként szolgál a kódoló szekvencia szintetizálásához. A fordított primer, amely 5'-3' irányban megnyúlik, hibridizálódik a kódoló vagy a nem templát vagy a szensz szál 3' végével. Kiindulási pontként szolgál a nem kódoló szekvencia szintetizálásához. Ez a különbség az előre és a fordított primer között.
