Fő különbség – DNS vs RNS extrakció
A DNS és az RNS tanulmányozása létfontosságú szempont a molekuláris biológia, a biotechnológia és a genetika alapfogalmainak megértéséhez. A tiszta DNS és RNS minták kinyerése szükséges a kísérleti eljárások elvégzéséhez a vizsgálatok során. A legfontosabb különbség a DNS és az RNS extrakció között az, hogy a DNS extrakciós folyamat tisztítja a DNS-t, míg az RNS extrakció az RNS-t. A DNS extrakciós folyamat három különböző lépésből áll: sejtlízis és membránlipidek és fehérjék katabolizmusa, a katabolitok csomósodása koncentrált sóoldattal és a DNS kicsapása etanollal. A háromlépéses eljárás két választható lépésből állhat. Az RNS-tisztítási folyamat négy különböző lépésből áll: guanidium-tiocianát hozzáadása a sejtlízishez, fehérje denaturálása, beleértve a ribonukleázokat, az RNS elválasztása kloroform és fenol hozzáadásával, valamint a csapadék etanollal történő mosása.
Mi az a DNS-kivonás?
A DNS-kivonás egy fizikai és kémiai eljárás, amelyet a DNS mintából való tisztítására használnak. A DNS-kinyerés fontos szempont a molekuláris biológia és a törvényszéki tudományok összefüggésében. A folyamat három alapvető lépésből áll. Kezdetben meg kell szerezni a kérdéses sejteket. Ezután a sejtlízist megkönnyítik a sejtmembrán feltörése érdekében, amely megnyitja a sejtet, és feltárja a citoplazmát a DNS-sel együtt. Felületaktív anyagok vagy más detergensek használhatók a lipidek sejtmembránból történő lízisére, miközben a jelenlévő fehérjéket proteázok katabolizálják. Ez egy opcionális lépés. Miután a sejt lizált, a katabolizált molekulák csomósodását elősegítik a koncentrált sóoldatok. Ezt követi az oldat centrifugálása, amely elválasztja a törmelékcsomókat a DNS-től. Ebben a szakaszban a differenciált DNS-t összekeverik a sejtciklus során használt reagensekkel és sókkal.
01. ábra: DNS-kivonás
A további tisztítás érdekében a következő lépéseket használhatja. Az egyik módszer az etanolos kicsapás, amelynek során jéghideg etanolt kevernek össze a leválasztott DNS-mintával. A DNS alkoholban oldhatatlan, így a DNS-molekulák aggregációja miatt pelletet képez. Ebben az eljárásban nátrium-acetátot adnak hozzá, hogy az ionerősség növelésével fokozzák a kicsapódás mértékét. Ehhez az etanolos kicsapáson kívül fenol-kloroform extrakciós eljárás is indukálható. Ennél a módszernél a fenol denaturálja a mintában lévő fehérjéket. Centrifugálás után a denaturált fehérjék a szerves fázisban maradnak, míg a kloroformmal kevert DNS-molekulák a vizes fázisban lesznek jelen. A kloroform eltávolítja a fenolmaradványokat. Az extrakció befejezése után a DNS-t TE pufferben vagy ultratiszta vízben oldva tartjuk.
Mi az RNS-kivonás?
RNS-tisztítás egy olyan eljárás, amelynek során az RNS-t biológiai mintából tisztítják. A ribonukleáz sejtekben és szövetekben való jelenléte miatt ez a folyamat bonyolult. A ribonukleáz enzim képes az RNS gyors lebontására. A ribonukleázok kémiai természete rendkívül stabil, és nehéz inaktiválni őket. A ribonukleázok semlegesítése egy lehetőség. Mivel ez az enzim mindenütt jelen van a sejtekben és a szövetekben, speciális technikákat fejlesztettek ki az RNS extrakciójára. A sok módszer közül az általános módszer a guanidinium-tiocinát-fenol-kloroformos extrakció.
02. ábra: RNS-kivonás
A guanidinium-tiocinát-fenol-kloroformos extrakciós módszer a centrifugálástól és a fázisszétválasztástól függ. A centrifugálandó keverék a vizes mintából és egy fenolból és kloroformból álló vízzel telített oldatból áll. Centrifugálás után az oldat egy felső vizes fázisból és egy alsó szerves fázisból áll, semleges pH-körülmények között (pH 7-8). Az RNS a vizes fázisban van jelen. A szerves fázis jellemzően fenolban oldott fehérjékből és kloroformban oldott lipidekből áll. Egy kaotrop szert (olyan molekulát, amely képes megszakítani a vízmolekulák közötti hidrogénkötéseket) adunk hozzá; ez guanidinium-tiocianát néven ismert. Ez az ágens képes denaturálni olyan fehérjéket, amelyek ribonukleázokat tartalmaznak, amelyek képesek lebontani az RNS-t, és részt vesznek a sejtlízisben. Ezenkívül elválasztja az rRNS-t a riboszómális fehérjéktől. Az RNS-tisztítás utolsó lépése a vizes fázis csapadékának etanollal történő mosása. Az RNS folyékony nitrogénnel is tisztítható.
Mi a hasonlóság a DNS és az RNS extrakció között?
- Mindkét extrakciós eljárás káros vegyi anyagokat, például fenolt és kloroformot használ.
- A centrifugálás mindkét folyamat alapvető technikája.
- Etanolt használnak a csapadék mosására és a tisztított DNS vagy RNS előállítására.
Mi a különbség a DNS- és az RNS-kivonás között?
DNS vs RNS-kivonás |
|
| DNS-kivonás egy olyan eljárás, amely DNS-t von ki egy szervezetből vagy mintából. | RNS-kivonás egy olyan eljárás, amely RNS-t von ki a mintából. |
| Lépések | |
| A DNS-kinyerési folyamat három különböző lépésből áll, két választható lépéssel. | Az RNS extrakciós folyamata négy különböző lépésből áll. |
| Reagensek | |
| A DNS-kivonáshoz felületaktív anyagokat, proteázokat (opcionális), alkoholt, kloroformot, fenolt, nátrium-acetátot használnak. | Guanidium-tiocianátot, kloroformot, fenolt, etanolt használnak az RNS extrakciójához. |
Összefoglaló – DNS vs RNS extrakció
A DNS- és RNS-kivonás létfontosságú szempont a molekuláris biológia, a genetika és a biotechnológia tanulmányozására irányuló kísérleti eljárásokban. Mindkét eljárás hasonló reagenseket foglal magában, de az RNS extrakcióhoz egy speciális, guanidium-tiocianát néven ismert reagenst használnak, amely csökkenti a ribonukleázok aktivitását. Ez a fő különbség a DNS és az RNS extrakció között.
DNS vs RNS-kivonás PDF-verziójának letöltése
Letöltheti ennek a cikknek a PDF-verzióját, és offline célokra használhatja az idézet jegyzetének megfelelően. Kérjük, töltse le a PDF-verziót innen: Különbség a DNS és az RNS-kivonás között
