Fő különbség – nitrocellulóz vs nejlon membrán
A blottolás fontos módszer a DNS, RNS és fehérjék specifikus szekvenciáinak kimutatására ezek keverékeiből a molekuláris biológiában. Ez egy blot nevű membrán segítségével történik. Különféle blottolási technikák léteznek, mint például az északi, déli és nyugati blottolás. A blottolási eljáráshoz megfelelő membrán kiválasztását gondosan kell elvégezni, hogy elkerüljük a nem specifikus kötődést és a téves kimutatásokat. A nitrocellulóz, a nejlon és a PVDF általában használt membránok a blottolási technikákban. Különböző tulajdonságokkal rendelkeznek. A legfontosabb különbség a nitrocellulóz és a nylon membrán között az, hogy a nitrocellulóz membránoknak magas a fehérje immobilizációs potenciálja, míg a nylon membránoknak magas a nukleinsav immobilizációs potenciálja. Mindazonáltal mindkét típusú membránt gyakran használják blottolási technikákban.
Mi az a nitrocellulóz membrán?
A nitrocellulóz membrán egy általánosan használt membránszűrő a nukleinsav- és fehérjeblot-technikákban. Magas fehérjekötő potenciállal rendelkezik. Ezért a nitrocellulóz membránokat széles körben használják a Western blot technikában. A nitrocellulóz membránok minden hibridizációs technikával kompatibilisek, és kiváló kötési kapacitást mutatnak interferencia nélkül. A nitrocellulóz membránok természetüknél fogva hidrofilek. Hidrofil kölcsönhatásba lépnek a molekulákkal, és hatékonyan rögzítik azokat a membránon. A kereskedelemben kapható nitrocellulóz membránok két pórusméretben kaphatók: 0,45 és 0,2 µm.
01. ábra: Western blottingban használt nitrocellulóz membrán
Mi az a nylon membrán?
A nylon membrán a blottolási technikákban használt kereskedelmi membrán egy másik típusa. Alternatív megoldásként nitrocellulóz membránokkal is használható Southern és Northern blottoláshoz. A nylon membránok ideálisak Southern blottoláshoz, mint a nitrocellulóz, mivel nagy affinitásuk van a DNS-hez való kötődéshez. A nylon membránok számos egyedi tulajdonsága miatt a kutatók általában nylon membránokat használnak déli és északi blottoláshoz a nitrocellulóz membrán helyett. A nylon membránokat a nitrocellulóztól eltérően sztrippelésre és újraszondázásra is ajánljuk.
02. ábra: Southern blottinghoz használt nylon membrán
Mi a különbség a nitrocellulóz és a nylon membrán között?
Nitrocellulóz vs Nylon membrán |
|
| A nitrocellulóz membránok törékenyek. | A nylon membránok kevésbé törékenyek. |
| Kezelés | |
| Nehezen kezelhetők. | Könnyen kezelhetők. |
| Reprobing | |
| A nem támogatott nitrocellulóz membránokat nehéz újrapróbálni. | A nylon membránokkal egyszerű az újraszondázás. |
| Különféle tárolási feltételekkel kompatibilitás | |
| A nitrocellulóz membránok kisebb szilárdsággal bírnak a különféle tárolási körülmények között. | A nylon membránok robusztusabban reagálnak a különféle tárolási körülményekre. |
| Használj | |
| Előmelegítés szükséges. | A nylon membránok előnedvesítése nem szükséges. |
| Hidrofil természet | |
| A nitrocellulóz membránok hidrofil természetűek, de kevésbé hidrofilek, mint a nylon membránok. | Erősen hidrofil természetűek. |
| Rögzítési lehetőség | |
| A nitrocellulóz membránok kisebb affinitással rendelkeznek a nukleinsavak iránt. De nagy affinitása van a fehérjékhez. | A nylon membránoknak nagyobb a nukleinsavakhoz való kötődési potenciálja, mint a nitrocellulóz membránoknak. |
Összefoglaló – Nitrocellulóz vs Nylon membrán
A nitrocellulóz és nejlon membránok speciális lapok, amelyeket a blotting technikában használnak a gél sávos mintázatának reprodukálására. Lehetővé teszik egy adott szekvencia vagy fehérje detektálását a keverékekből a membránon történő rögzítéssel. Miután a molekulák immobilizálódtak a membránon, szubsztrátként használható a jelzett próbákkal végzett hibridizációs elemzéshez. A nitrocellulóz membránt általában fehérjék kimutatására használják a Western blot technikában, mivel nagy kötési affinitása van a fehérjékhez. A nylon membránokat gyakran használják déli és északi blottoláshoz. Ez a különbség a nitrocellulóz és a nylon membrán között.
