A legfontosabb különbség a mikronukleusz- és az üstökösvizsgálat között az, hogy a mikronukleusz-vizsgálat fontos a mutagénexpozíció következtében fellépő kromoszómakárosodások ellenőrzéséhez, míg az üstökösvizsgálat az egyes sejtekben lévő elsődleges DNS-károsodás kimutatásához.
A genotoxicitási vizsgálatok segítenek felmérni a mutációk és kromoszóma-rendellenességek lehetőségét. A genotoxinok közé tartoznak a kémiai anyagok és a sugárzás. A rákkeltő anyagok, mutagének és teratogén anyagok a genotoxinok fő kategóriái. Különféle károsodásokat okoznak, mint például pontmutációk, deléciók, egy- és kétszálú törések, kromoszóma-rendellenességek, mikronukleusz-képződmények, DNS-javítás és sejtciklus-kölcsönhatások. Az ilyen állapotok számos betegséghez vezethetnek, és a genotoxicitási vizsgálatok megakadályozzák az ilyen állapotok lehetséges károsodását. A mikronukleusz-vizsgálat és az üstökösvizsgálat két technika a genotoxicitási vizsgálatok során.
Mi az a Micronucleus Assay?
A Micronucleus assay a mutagén expozíció következtében fellépő kromoszómakárosodás értékelésére szolgáló vizsgálat. Fontos az orsóképződést és mikronukleuszokat okozó vegyszerek szűrésében. A mikronukleusz-vizsgálat információt nyújt a vegyi anyagok stabilitásáról, amikor megzavarják a kromoszóma szerkezetét és működését. Számos rákkeltő anyag pozitív a mikronukleusz-tesztekben. A vizsgálati eljárás magában foglalja a kémiai kezelést és a mikronukleált sejtek gyakoriságának mérését. Ha a mikronukleuszsejtek száma abnormálisan megnövekszik, arra a következtetésre jut, hogy a vegyszer kromoszómakárosodást okoz.
A mikronukleusz-vizsgálatot általában aktívan osztódó sejteken végzik. Ezért a sejtosztódással előállított eritrociták és csontvelői őssejtek ideális jelöltek az ilyen vizsgálatokhoz. Állandó és gyors forgást tapasztalnak. Mivel az eritrocitáknak nincs valódi magjuk, a mikronukleáris sejteket jobban láthatóvá teszi a vizsgálat végén.
01. ábra: Micronucleus Assay megfigyelés
A Micronucleus vizsgálatok gazdaságosak, gyorsabbak, kényelmesek, és kevesebb készségeket igényelnek a végrehajtásuk. Gyorsan, megbízhatóan tükrözik a kromoszóma-rendellenességeket, és rendkívül hasznosak a kromoszómakárosodás gyors felmérésében. A micronucleus assay egy speciális és sokoldalú típusa a citokinézis blokk mikronucleus citome (CBMNcyt) vizsgálat. Ez az előnyben részesített vizsgálati módszer a sejtek kromoszómakárosodásának és instabilitásának mérésére. A micronucleus assay használatának fő problémája azonban, hogy nem képes meghatározni a különböző típusú kromoszóma-rendellenességeket, és az assay befolyásolja a mitotikus sebességet és a sejthalál arányát, ami az eredmények megváltozását okozza.
Mi az a Comet Assay?
Az üstökös vizsgálat, amely egygél elektroforézis vizsgálatként is ismert, egy egyszerű és érzékeny technika a DNS-károsodás kimutatására. Méri az eukarióta sejtekben bekövetkező DNS-töréseket, és a biomonitoring és a genotoxicitás tesztelésének standard technikája.
Az üstökösvizsgálat részt vesz a sejtek alacsony olvadáspontú agaróz-szuszpenziókba zárásában, a sejtek semleges vagy lúgos körülmények között történő lízisében, valamint a szuszpendált lizált sejtek elektroforézisében. A kapszulázási folyamat során a sejteket olvadt alacsony olvadáspontú agarózban szuszpendálják, és az agaróz szénhidrátszálak mátrixát képezi, hogy rögzítse őket. Az agaróz ozmotikusan semleges; így lehetővé teszi, hogy az oldatok áthatoljanak a gélen, és anélkül hatnak a sejtekre, hogy megzavarnák és eltolnák azokat. A lízisoldat erősen tömény vizes sóoldat és detergens. Ez a só megzavarja a fehérjéket és a sejten belüli kötési mintákat, miközben megzavarja a sejt RNS-tartalmát. A sejtek elpusztítják, és az összes fehérje, RNS, citoplazmatikus és nukleoplazmatikus alkotórészek megzavarják és bediffundálnak az agaróz mátrixba, és elhagyják a DNS-t.
02. ábra: Üstökösvizsgálat
Az elektroforézis oldat lúgos oldat, amelyben a DNS kettős hélix denaturálódik, és a nukleoid egyszálúvá válik. A folyamat során elektromos mezőt alkalmaznak a képek elemzéséhez. A képelemzés méri a DNS és a nukleoid fluoreszcenciájának általános intenzitását, és összehasonlítja a kettőt. Az általános szerkezet egy üstökösre hasonlít, amelynek kör alakú feje megfelel a megmaradt sértetlen DNS-nek, és egy farka a sérült DNS számára. Minél világosabb és hosszabb a farok az erősebb jeleknek köszönhetően, annál nagyobb a sérülés mértéke.
Mi a hasonlóság a mikronukleusz és az üstökösvizsgálat között?
- A Micronucleus és az üstökös-teszt gazdaságos, gyorsabb, kényelmes, és kevesebb szakértelmet igényel.
- Főleg DNS-en hajtják végre.
- Mindkét teszt segít a mutációk és kromoszóma-rendellenességek felmérésében.
- Sőt, mindkét technika vegyi anyagokat használ az eljárás végrehajtásához.
Mi a különbség a Micronucleus és Comet Assay között?
A micronucleus assay fontos a mutagén expozíció következtében fellépő kromoszómakárosodás ellenőrzésében, míg az üstökösvizsgálat az egyes sejtekben az elsődleges DNS-károsodás kimutatásában. Így ez a legfontosabb különbség a mikronukleusz és az üstökösvizsgálat között. Ezenkívül a mikronukleusz-vizsgálat jól bevált a klasztogenitás és aneugenitás kimutatására. Az üstökösvizsgálatot genotoxicitási tesztként használják a sejtek elsődleges DNS-károsodásának kimutatására. Ezenkívül a mikronukleusz-teszt a vegyi anyagok stabilitásáról nyújt információt, míg az üstökösvizsgálat egy egysejtű gélelektroforézis.
Az alábbi infografika táblázatos formában mutatja be a mikronukleusz- és üstökösvizsgálat közötti különbségeket az egymás melletti összehasonlításhoz.
Összefoglaló – Micronucleus vs Comet Assay
A genotoxicitási vizsgálatok segítenek felmérni a mutációk és kromoszóma-rendellenességek lehetőségét. A mikronukleusz-vizsgálat és az üstökösvizsgálat két technika a genotoxicitási vizsgálatok során. A Micronucleus assay felméri a kromoszómakárosodást a mutagén expozíció következményeként. Az üstökösvizsgálat egy egyszerű és érzékeny technika a DNS-károsodás kimutatására. Tehát ez a legfontosabb különbség a mikronukleusz és az üstökösvizsgálat között. A mikronukleusz-vizsgálat fontos az orsóképződést és mikronukleuszokat okozó vegyszerek szűrésében. Az üstökösvizsgálat részt vesz a sejtek alacsony olvadáspontú agaróz-szuszpenziókba zárásában, a sejtek lízisében semleges vagy lúgos körülmények között, valamint a szuszpendált lizált sejtek elektroforézisében.
