A fő különbség a BCA és a Bradford vizsgálat között az, hogy a BCA vizsgálat időigényes és kevésbé pontos, míg a Bradford assay gyors és pontos.
A BCA és Bradford vizsgálat a fehérjekoncentráció meghatározásának két vizsgálati módszere. Ennek a két vizsgálati eljárásnak eltérő a vizsgálati elve, és eltérő a pontosságuk.
Mi az a BCA-vizsgálat?
A BCA-teszt vagy a bicinkoninsav-teszt egy biokémiai vizsgálat, amely alkalmas az oldatban lévő fehérje összkoncentrációjának meghatározására. Ezt a módszert feltalálója, Paul K. Smith után Smith-tesztnek is nevezték. Ez az analitikai módszer hasonlóságot mutat a Lowry-fehérje-vizsgálattal, a Bradford-fehérje-vizsgálattal vagy a biuret-reagenssel. Egy adott mintában a teljes fehérjekoncentrációt a mintaoldat színváltozásán keresztül figyelhetjük meg, amely zöldről lilára változik. Ez a színváltozás a fehérjetartalom arányában következik be. Ezt követően kolorimetriás technikával elemezhetjük a minta színintenzitását és fehérjetartalmát.
BCA fehérjebecslési módszer
A BCA-teszt mechanizmusát tekintve a tipikus BCA-oldat erősen lúgos oldatot tartalmaz, amelynek pH-értéke közel körülbelül 11,25, és az oldat összetevői közé tartozik a bicinkoninsav, nátrium-karbonát, nátrium-hidrogén-karbonát, nátrium-tartarát és réz(II)-szulfát-pentahidrát. Ez a vizsgálat elsősorban két kémiai reakción múlik: a réz(II) redukálása réz(I)-vé a fehérje peptidkötései által, valamint két bicinkoninsavmolekula réz(I)-ionnal történő kelátozása, ami egy lila színű komplexet eredményez, amely elnyelik a fényt 562 nm hullámhosszon. Az első reakcióban a peptidkötésekkel redukált réz(II) mennyisége arányos a mintában lévő fehérje mennyiségével.
Mi az a Bradford Assay?
A Bradford assay egy spektroszkópiai analitikai módszer, amely hasznos az oldatban lévő fehérjekoncentráció mérésére. Ezt a módszert Marion M. Bradford fejlesztette ki 1976-ban, és ez egy viszonylag gyors és pontos módszer.
A fehérje és a Bradford-reagens színreakciója
Ezzel a módszerrel meghatározhatjuk a mintában lévő fehérje mennyiségét. A vizsgálat során a mintában végbemenő kémiai reakció kizárólag a mintában lévő fehérje aminosav-összetételétől függ.
Bradford fehérjebecslési módszer
A vizsgálat módszerét tekintve, ez egy kolorimetriás fehérjevizsgálat, amely a Coomassie Brilliant Blue G-250 nevű festék abszorbanciaeltolódásán alapul. Általában ez a festék három formában létezik: anionos (kék), semleges (zöld) és kationos (piros) formában. Ezért savas körülmények között a festék színe vörösről kékre változik. Ez annak köszönhető, hogy a fehérje kötődik a festékhez. Ezzel szemben, ha nincs a festékhez kötődő fehérje, a színváltozás nem jelentkezik, az oldat vörösesbarna színt kap. Ez a festék képes erős, nem kovalens komplexet képezni a fehérje karboxilcsoportjával a Van der Waal-erők és az elektrosztatikus vonzás révén.
Mi a különbség a BCA és a Bradford Assay között?
A BCA és Bradford vizsgálat a fehérjekoncentráció meghatározásának két vizsgálati módszere. Ennek a két vizsgálati eljárásnak eltérő a vizsgálati elve, és különbségek vannak a pontosságukban. A legfontosabb különbség a BCA és a Bradford assay között az, hogy a BCA vizsgálat időigényes és kevésbé pontos, míg a Bradford assay gyors és pontos.
A következő infografika táblázatos formában foglalja össze a BCA és a Bradford vizsgálat közötti különbségeket.
Összefoglaló – BCA vs Bradford Assay
A BCA-teszt vagy a bicinkoninsav-teszt egy biokémiai vizsgálat, amely alkalmas az oldatban lévő fehérje összkoncentrációjának meghatározására. A Bradford assay egy spektroszkópiai analitikai módszer, amely alkalmas az oldatban lévő fehérje koncentrációjának mérésére. A legfontosabb különbség a BCA és a Bradford-teszt között az, hogy a BCA időigényes és kevésbé pontos, míg a Bradford-teszt gyors és pontos.
