A legfontosabb különbség a kromatofókuszálás és az izoelektromos fókuszálás között az, hogy a kromatofókuszálás egy olyan oszlopkromatográfiás módszer, amely ioncserélő gyantákat használ, míg az izoelektromos fókuszálás egy olyan elektroforézis technika, amely rögzített pH-gradiens géleket használ.
A kromatofókuszálás és az izoelektromos fókuszálás két olyan technika, amely a fehérjéket izoelektromos pontjaik szerint választja el egymástól. Mind a kromatofókusznak, mind az izoelektromos fókuszálásnak nagy felbontóképessége van. A kromatofókuszálás egy nagy felbontású oszlopkromatográfiás módszer, míg az izoelektromos fókuszálás egy elektroforetikus elválasztási módszer. Ezenkívül a kromatofókuszálás nem használ elektromos mezőt, míg az izoelektromos fókuszáláshoz elektromos mezőre van szükség.
Mi az a kromatofókuszálás?
A kromatofókuszálás a nagy elúciós kromatográfia egyik fajtája, amely a fehérjéket az izoelektromos pontjuk különbsége szerint választja el. Ioncserélő gyanta oszlopot és belső fejlesztésű pH gradienst használ. Az izoelektromos fókuszálástól eltérően a kromatofókuszálás nem jár elektromos mezővel. A kromatofókuszálás egy hatékony tisztítási technika, amely képes feloldani a nagyon hasonló molekulákat, amelyek csak 0,02 pH-egységgel különböznek egymástól. Ezért a kromatofókusz a legalkalmasabb végső polírozási lépésként, amikor nagy felbontásra van szükség a nagyon hasonló alkatrészek szétválasztásához.
A kromatofókuszálás során a mintát a startpufferrel összekeverve viszik fel az oszlopra. Azok a fehérjék, amelyek pH-értéke az izoelektromos pontjuk felett vannak, negatív töltésűek, és az oszlop teteje közelében maradnak, míg más fehérjék, amelyek pH-értéke az izoelektromos pontjuk alatt vannak, levándorolnak az oszlopon. A legmagasabb izoelektromos pontú fehérje eluálódik először, míg a legalacsonyabb izoelektromos ponttal rendelkező fehérje eluálódik utoljára az oszlopról. Ezt a technikát számos tényező befolyásolja, például a fehérje kicsapódása és a pH-gradiens linearitása.
Mi az izoelektromos fókuszálás?
Az izoelektromos fókuszálás olyan technika, amely a különböző molekulákat izoelektromos pontjuk alapján választja el egymástól. Elektrofókusznak is nevezik. Ezt a technikát gyakran használják fehérjeleválasztásra gélben. Az izoelektromos fókuszálás során a mintát immobilizált pH-gradiens (IPG) gélekbe adjuk. Az IPG gél egy pH-gradienssel kopolimerizált akrilamid gélmátrix. A fehérjék addig vándorolnak a katód felé, amíg meg nem találják izoelektromos pontjaik pH-tartományát. Amikor egy fehérje eléri a pH-értéket, amelynek nincs nettó töltése, a migráció leáll, és stacioner sávot ad. Hasonlóképpen, minden fehérje a pH-gradiens egy pontján ad egy sávot, amely megfelel az izoelektromos pontjának.
01. ábra: Izoelektromos fókuszálás
Az izoelektromos fókuszálás a kétdimenziós gélelektroforézis első lépése. Ebben a technikában a fehérjéket először izoelektromos pontjaik szerint választják el izoelektromos fókuszálással, majd molekulatömegük alapján SDS-PAGE-val.
Mi a hasonlóság a kromatofókuszálás és az izoelektromos fókuszálás között?
- A kromatofókuszálás és az izoelektromos fókuszálás két nagy felbontású módszer.
- Mindkettő a fehérjék izoelektromos pontján alapul.
- Ezek a technikák pH gradienst használnak.
- Mindkét eljárás tájékoztató jellegű a humán hemoglobin variánsok jellemzéséhez.
- Korábban 0,02 pH-egységgel képesek feloldani azokat a molekulákat, amelyeknél a pI értékek különböznek egymástól.
Mi a különbség a kromatofókuszálás és az izoelektromos fókuszálás között?
A kromatofókuszálás egy nagy felbontású oszlopkromatográfiás technika, amely a fehérjéket izoelektromos pontjuk szerint választja el. Ezzel szemben az izoelektromos fókuszálás egy elektroforetikus technika, amely a fehérjéket izoelektromos pontjuk szerint választja el elektromos tér alkalmazásával egy kapillárisban kialakult pH-gradiens mentén. Tehát ez a legfontosabb különbség a kromatofókusz és az izoelektromos élességállítás között.
A másik különbség a kromatofókuszálás és az izoelektromos fókuszálás között az, hogy a kromatofókuszálás nem jár elektromos mezővel, míg az izoelektromos fókuszáláshoz elektromos mezőre van szükség.
Összefoglaló – kromatofókuszálás vs izoelektromos fókuszálás
A kromatofókuszálás és az izoelektromos fókuszálás két hasonló technika, amelyek molekulák, különösen nagyon hasonló molekulák nagy feloldóképességével rendelkeznek. A kromatofókuszálás egy nagy felbontású oszlopkromatográfiás technika, míg az izoelektromos fókuszálás egy elektroforézis módszer. A kromatofókuszálás nem jár elektromos mezővel, ellentétben az izoelektromos fókuszálással. Így ez összefoglalja a különbséget a kromatofókusz és az izoelektromos fókuszálás között.
