Kulcs különbség – SDS-oldal vs Western Blot
A Western blotting egy olyan technika, amely egy specifikus fehérjét detektál egy fehérjemintából. Ezt a technikát több kulcslépésben hajtják végre: gélelektroforézis, blottolás és hibridizáció. A nátrium-dodecil-szulfát-poliakrilamid gélelektroforézis (SDS Page) egyfajta gélelektroforézis technika, amelyet a fehérjék méretük (molekulatömegük) szerinti elkülönítésére használnak. A Western blot egy speciális blot-membrán lap, amelyet az SDS-oldalon lévő fehérjék ugyanazon mintázatának átvitelére használnak. A legfontosabb különbség az SDS Page és a Western blot között az, hogy az SDS Page lehetővé teszi a fehérjék elválasztását egy keverékben, míg a Western blot lehetővé teszi egy specifikus fehérje kimutatását és mennyiségi meghatározását a keverékből. Mindkettő hasznos a fehérjeelemzési vizsgálatokban.
Mi az az SDS-oldal?
Az SDS Page egy gélelektroforézis-technika, amelyet fehérjeelválasztásra használnak. Általában a biokémiában, a genetikában, a törvényszéki orvostudományban és a molekuláris biológiában használják. Miután a fehérjéket kivonták a mintából, SDS-ből és poliakrilamidból álló gélen futtatják őket. Az SDS egy anionos detergens, amelyet fehérjék linearizálására (fehérjék denaturálására) használnak, és molekulatömegükkel arányos negatív töltést adnak a linearizált fehérjéknek. A poliakrilamid lesz a gél szilárd hordozója. A negatív töltésű denaturált fehérjék a készülék pozitív vége felé vándorolnak a gélen keresztül. A fehérjék méretétől függően a migrációs sebesség a fehérjék között eltér, és szétválás következik be. Ezért az SDS oldal hasznos az egyes fehérjék méretük alapján történő szétválasztására.
A poliakrilamid gél előállítása a fehérjék frakcionálására az SDS oldal egyik döntő lépése. A poliakrilamid megfelelő koncentrációja és az alkalmazott térhálósító szer típusa erősen befolyásolja a gél fizikai tulajdonságait, ami a különböző fehérjék tényleges szétválását teszi lehetővé. A hatékony elválasztás érdekében a gél pórusméretét megfelelően kell kezelni. Az SDS Page azonban nagy felbontású fehérjeleválasztási technikának számít.
SDS Page technikának van egy jelentős korlátja a fehérjeanalízisben. Mivel az SDS denaturálja a fehérjéket az elválasztás előtt, nem teszi lehetővé az enzimaktivitás, a fehérjekötési kölcsönhatások, a fehérje kofaktorok stb. kimutatását.
01. ábra: SDS-oldal
Mi az a Western Blot?
A Western blotting technika lehetővé teszi egy adott fehérje kimutatását fehérjekeverékből, valamint a fehérje mennyiségének és molekulatömegének mérését. A Western blot az a membrán, amelyet a blottolási eljárás során használnak az SDS-poliakrilamid gél fehérjemintáinak tükörképéhez. A Western blottoláshoz használt membrán többnyire nitrocellulózból vagy polivinilidén-difluoridból (PVDF) készül. Az átvitt fehérjét tartalmazó membrán felhasználható a kívánt fehérje azonosítására. Kiváló minőségű antitestet igényel a kívánt fehérje hibridizációval történő kimutatásához. Az antitest kötődik specifikus antigénjéhez, és felfedi a kívánt antigén jelenlétét, amely fehérje.
A fehérjék átvitelét az SDS poliakrilamid gélről a Western blot-ra elektroblottal végezzük. Ez egy hatékony és gyors módszer, amellyel a fehérjék elektroforézissel távoznak a gélből, és átjutnak a nitrocellulóz membránra (Western blot).
02. ábra: Western Blot
Mi a különbség az SDS Page és a Western Blot között?
SDS-oldal vs Western Blot |
|
| SDS Page egy gélelektroforézis technika. | A Western blot egy olyan technika, amelyet egy membránon végeznek el egy specifikus fehérje kimutatására egy keverékből. |
| Használj | |
| SDS oldal lehetővé teszi a fehérjék méretük szerinti elkülönítését. | A Western blot lehetővé teszi a fehérjék átvitelét az SDS oldalgélen anélkül, hogy megváltoztatná a mintáját, és lehetővé teszi a hibridizációt specifikus antitestekkel. |
| Hátrányok | |
| A fehérjék denaturációja, a magas költségek és a neurotoxinok jelenléte ennek a technikának a hátránya. | Ez a technika időigényes, és tapaszt alt személyi és speciális ellenőrzött feltételeket igényel. |
Összefoglaló – SDS-oldal vs Western Blot
Az SDS oldal és a Western blot a fehérjeanalízis két módszere. Az SDS oldal lehetővé teszi a fehérjék egyszerű szétválasztását a gélen molekulatömegük szerint. A Western-blot specifikus antitestekkel való hibridizáció révén segít megerősíteni egy specifikus fehérje jelenlétét és mennyiségét. Ez a különbség az SDS-oldal és a Western blot között.
