PCR vs valós idejű PCR
A PCR vagy polimeráz láncreakció egy forradalmasított felfedezés a modern molekuláris biológiában, amelyet először Kary Mullis vegyész dolgozott ki 1983-ban. Lehetővé teszi, hogy egy összetett DNS egyetlen szekvenciáját amplifikálják elemzés céljából. A PCR alapötlete az, hogy két primer, amelyek komplementerek egy DNS-szekvencia ellentétes szálaival, egymás felé orientálódnak; a primerek komplementer szálakat hoznak létre, amelyek mindegyike tartalmazza a másik primert. Ezért az eredmény egy nagy mennyiségű szekvencia, amely megfelel a két primer között elhelyezkedő DNS-nek. DNS polimeráz enzimet használnak a primerek kiterjesztésére a PCR-ben. A DNS-polimeráz egy hőstabil enzim, és képes túlélni a templát DNS denaturálására használt magas hőmérsékleteket (94-95 °C).
A PCR három lépésből áll, nevezetesen ismételt denaturálási körből, a primerek összekapcsolásából és a DNS szintéziséből. Ezt a reakciót termociklusos géppel hajtják végre, így programozható a hőmérséklet gyors és pontos változtatására. A PCR alkalmazásai a bűnügyi nyomozás, a DNS-ujjlenyomat, a kórokozók kimutatása és a korai emberi fajok DNS-ének elemzése.
Mi az a hagyományos PCR?
A hagyományos PCR-nek három fő szakasza van, nevezetesen; DNS-amplifikációs szakasz, a PCR elválasztása és a termékek kimutatása. A DNS-szegmensek szétválasztását általában agaróz gélelektroforézissel végzik. A termékeket ezután etheiduim-bromiddal megfestjük. Végül a kimutatást a géleken lévő sávok UV-fényben történő megjelenítésével érik el. Ezért a hagyományos PCR végeredményét nem számokban fejezzük ki. Általában a hagyományos PCR csak egyetlen paramétert képes kimutatni.
Mi az a valós idejű PCR?
A valós idejű PCR képes kimutatni a termékek amplifikációját, mivel a termékek szintetizálódnak. A technológia fejlődésével a PCR nagyon népszerű technikává vált, különösen az élelmiszerekben lévő baktériumok kimutatására és azonosítására. A valós idejű PCR fluoreszcens festékrendszert és termociklert használ, amely fluoreszcens detektálási képességgel rendelkezik.
Mi a különbség a hagyományos PCR és a valós idejű PCR között?
• A hagyományos PCR időigényesebb, mivel gélelektroforézist használ az amplifikált PCR-termékek elemzésére. Ezzel szemben a valós idejű PCR kevésbé időigényes, mivel képes kimutatni az amplifikációkat a reakció korai fázisaiban.
• A valós idejű PCR a PCR exponenciális növekedési fázisában gyűjt adatokat, míg a hagyományos PCR a reakció végpontján.
• Lehet, hogy a hagyományos PCR végponti eredményei nem túl pontosak, de a valós idejű PCR eredményei nagyon pontosak.
• A valós idejű PCR érzékenyebb, mint a hagyományos PCR.
• A hagyományos PCR nagyon gyenge felbontású, míg a valós idejű PCR nagyon kevés változást képes észlelni a nagy felbontás miatt.
• A hagyományos PCR végpont-detektálása rövid, míg a valós idejű PCR-detektálás széles dinamikatartománnyal rendelkezik.
• A hagyományos PCR-rel ellentétben a valós idejű PCR-ben automatizált kimutatási technikák találhatók.
• A hagyományos PCR rendkívül kifinomult és munkaigényesebb, mint a valós idejű PCR.
• A valós idejű PCR-rel ellentétben a hagyományos PCR nem tud különbséget tenni elh alt és élő baktériumok között.
• A valós idejű PCR fluoreszcens festékrendszert használ a termékek kimutatására, míg a hagyományos PCR etidium-bromidot és UV-fényt használ az agarózgél közegben lévő sávok megjelenítésére.
