A legfontosabb különbség az élesztő egy hibrid és az élesztő kettő hibrid között az, hogy az élesztő egy hibrid egy in vitro alapú vizsgálat a DNS-fehérje kölcsönhatások elemzésére, míg az élesztő kettő hibrid egy in vitro alapú vizsgálat a fehérje-fehérje kölcsönhatások elemzésére.
A sejtmolekulák közötti kölcsönhatások tanulmányozása segíthet meghatározni azokat a felismerési helyeket, amelyek részt vesznek a génexpresszióban és a fehérje útvonalakban. A DNS és a fehérje kölcsönhatások szerves részét képezik a sejtfolyamatoknak, például a DNS-módosításoknak és a transzkripciós szabályozásnak stb. Másrészt a fehérje és fehérje kölcsönhatások létfontosságú szerepet játszanak a sejtfolyamatokban, például a replikációban, transzkripcióban, transzlációban és jelátvitelben. Ezért rendkívül fontos a sejtmolekulák ezen kölcsönhatásainak azonosítása különböző vizsgálatok segítségével. Az élesztő egy hibrid és az élesztő kettő hibrid két in vitro alapú vizsgálat a DNS-fehérje és a fehérje-fehérje kölcsönhatások elemzésére.
Mi az az Yeast One Hybrid?
Az Yeast one hibrid (Y1H) egy in vitro alapú vizsgálati eljárás az intracelluláris DNS-fehérje kölcsönhatások elemzésére. Ezt a módszert először Wang és Reed dolgozta ki 1993-ban. Azóta nagyobb hatalmat mutatott be a biológiai kutatásban. Ebben a vizsgálatban két fő összetevő van: DNS-csali és fehérjezsákmány.
01. ábra: Yeast One hibrid
Az eljárás során először egy DNS-szekvenciát (DNS-csalit) klónoznak két különböző riporter (HIS3, LacZ) előtt. Ezek a riporter konstrukciók egy élesztőtörzs genomjába integrálódnak. A transzkripciós faktorokat fehérjezsákmányként veszik fel. A transzkripciós faktorokat az élesztő Gal4 transzkripciós faktor transzkripciós aktivációs doménjéhez (AD) fuzionálják, hogy hibrid fehérjéket állítsanak elő. Ezt a teljes hibrid fehérjét egy plazmidba integrálják, mielőtt bevinnék az élesztőtörzsbe. A rekombináns plazmid bejuttatása után, amikor a transzkripciós faktor kölcsönhatásba lép a DNS-fragmenssel, az AD-rész aktiválja a riportergén-expressziót (HIS3 vagy LacZ). A plazmidok szekvenálása lehetővé teszi a DNS-fragmenshez kötődni képes transzkripciós faktor azonosítását. A közelmúltban az yeast one hibrid módszert alkalmazták a betegségek diagnosztizálására. Ezért a jövőben ezt a vizsgálatot szélesebb körben használják majd a tudományos kutatásban és az orvosi kezelésekben.
Mi az az Yeast Two hibrid?
Az Yeast Two hibrid (Y2H) egy in vitro alapú vizsgálat az intracelluláris fehérje és a fehérje kölcsönhatások elemzésére. Ezt a módszert eredetileg Stanley Fields és Ok-Kyu Song találta meg 1989-ben. Ez a technika az élesztő Gal4 transzkripciós faktora segítségével detektálja a fehérje-fehérje kölcsönhatásokat.
02. ábra: Yeast Two hibrid
Ennél a módszernél először két fúziót (hibridet) hoznak létre az érdeklődésre számot tartó fehérjék felhasználásával: az egyik fehérjét a DNS-kötő doménnel (DBD), a másik fehérjét pedig a Gal4 transzkripciós faktor aktivátor doménjével (AD) fuzionálják.. A DBD-vel fuzionált fehérjét csalinak, míg az AD-vel fuzionált fehérjét prédának nevezik. Az élesztőtörzsben a csali és a zsákmány kölcsönhatására a DBD és az AD szoros közelségbe kerül, hogy funkcionális Gal4 transzkripciós faktort hozzon létre a riportergén előtt. A funkcionális transzkripciós faktor aktiválja a riportergén expresszióját. Ezenkívül ezt a módszert jelenleg az integrált membránfehérjék kölcsönhatásainak szűrésére használják emlőssejtekben.
Mi a hasonlóság az Yeast One Hybrid és az Yeast Two hibrid között?
- Az élesztő egy hibrid és az élesztő kettő hibrid két in vitro alapú vizsgálat a DNS-fehérje és a fehérje-fehérje kölcsönhatások elemzésére.
- Ezek a vizsgálatok élesztőtörzseket használnak.
- Mindkét vizsgálat a Gal4 transzkripciós faktor aktiválási doménjét (AD) használja.
- A riportergén (HIS3 vagy LacZ) expresszióját használják az interakciók kimutatására.
- Van csalik és zsákmányuk.
- Mindkét vizsgálati módszer rendkívül hasznos a modern biológiai kutatásban.
Mi a különbség az Yeast One hibrid és az Yeast Two hibrid között?
Az élesztő egy hibrid egy in vitro alapú vizsgálat a DNS és fehérje kölcsönhatások elemzésére, míg az yeast two hibrid egy in vitro alapú vizsgálat a fehérje és fehérje kölcsönhatások elemzésére. Így ez a legfontosabb különbség az élesztő egy hibrid és az élesztő két hibrid között. Továbbá az élesztő egy hibridjében a csali egy DNS-fragmens, a zsákmány pedig egy fehérjemolekula. Másrészt az élesztő két hibridben a csali és a zsákmány is fehérjemolekulák.
Az alábbi infografika táblázatos formában felsorolja az élesztő egy hibrid és az élesztő két hibrid közötti különbségeket egymás melletti összehasonlítás céljából.
Összefoglaló – Yeast One hibrid vs Yeast Two hibrid
Az élesztő egy hibrid és az élesztő két hibrid két fontos in vitro alapú vizsgálat. Az élesztő egy hibrid egy in vitro alapú vizsgálat a DNS és fehérje kölcsönhatások elemzésére, míg az élesztő kettő hibrid egy in vitro alapú vizsgálat a fehérje és fehérje kölcsönhatások elemzésére. Így ez a legfontosabb különbség az élesztő egy hibrid és az élesztő két hibrid között.
