A legfontosabb különbség a BL21 és a DH5 Alpha között az, hogy a BL21 egy proteázhiányos, genetikailag módosított kompetens E. coli sejt, amelyet elsősorban fehérjeexpresszióra használnak, míg a DH5 Alpha egy genetikailag módosított kompetens E. coli sejt, elsősorban recA1 mutációval. plazmid transzformációhoz.
E. coli a rekombináns fehérjetermelés egyik leghíresebb szervezete. Az évek során ez lett a legnépszerűbb kifejezési platform. Sejtgyárnak is használják. A BL21 és a DH5 Alpha két genetikailag módosított E. coli sejt, amelyeket jelenleg fehérjeexpresszióra, illetve plazmidtranszformációra használnak.
Mi az a BL21?
A BL21 egy proteázhiányos, genetikailag módosított kompetens E. coli sejt, amelyet elsősorban fehérjeexpresszióra használnak. Az E. coli BL21 a B törzsből származó baktériumsejt. A Lon proteáz és az ompT külső membrán proteáz hibái vannak. Általában rekombináns fehérjeexpresszióra használják, mivel általában stabilitást kölcsönöz az expresszált fehérjéknek. A BL21 hasznos fehérjeexpresszióhoz pCold I-IV DNS-sel és pCold TF DNS-sel. Ezt a kompetens E. coli sejtet azonban nem T7 promotert használó fehérje expressziós rendszerhez, például pET rendszerhez szánják. Ennek az az oka, hogy a BL21 nem expresszál T7 RNS polimerázt. Ezenkívül nem ajánlott plazmid létrehozására vagy előállítására használni, mivel nem tartalmaz recA mutációt.
01. ábra: BL21
A BL21-et Studier írta le először 1986-ban, a B vonal különféle módosításait követően. A BL21 sejtekben hiányzik a LON proteáz, amely sok idegen fehérjét lebont. Ezenkívül hiányzik egy másik gén, amely a külső membrán proteázt (OmpT) kódolja, amelynek feladata az extracelluláris fehérjék lebontása. Ezeknek a fehérjéknek a hiánya beindítja az idegen fehérje sikeres termelését az E. coli BL21 sejtekben. Ezenkívül ezekben a sejtekben a hsdSB mutáció megakadályozza az idegen DNS metilációját és a BL21 sejtekben történő megzavarását.
Mi az a DH5 Alpha?
DH5 Alpha egy genetikailag módosított kompetens E. coli sejt recA1 mutációval, amelyet elsősorban plazmid transzformációra használnak. A DH5 Alpha E. coli sejteket Douglas Hanahan amerikai biológus genetikailag módosította, hogy maximalizálja a transzformáció hatékonyságát. A DH5 alfa sejtnek három különböző mutációja van: recA1, endA1 és lacZΔM15. A recA1 egy egypontos mutáció, amely a glicin 160-at helyettesíti a recA polipeptidben és aszparaginsavval. Ez a mutáció letiltja a rekombinázok aktivitását és inaktiválja a homológ rekombinációt. endA1 mutáció inaktivál egy intracelluláris endonukleázt, amely megakadályozza, hogy lebontsa a beépített plazmidot.
02. ábra: DH5 Alpha
Sőt, a lacZΔM15 mutáció lehetővé teszi a transzformált sejtek kék-fehér szűrését. Ezek a sejtek kompetens sejtek. Gyakran használják kalcium-kloridos transzformációval a kívánt plazmid beépítésére. A közelmúltban végzett kutatások kimutatták, hogy a Hanahan-módszerrel végzett DH5 Alpha sejt volt a leghatékonyabb kompetens sejt a plazmid transzformációban.
Mi a hasonlóság a BL21 és a DH5 Alpha között?
- A BL21 és a DH5 Alpha két genetikailag módosított E.coli
- Mindkettő kompetens sejt.
- Elkülönülő mutációkból állnak.
- Mindkettőnek nincs természetes élőhelye.
- Ezeket laboratóriumi célokra használják, például expressziós vizsgálatokhoz és klónozási eljárásokhoz.
Mi a különbség a BL21 és a DH5 Alpha között?
A BL21 egy proteázhiányos, genetikailag módosított kompetens E. coli sejt, amelyet elsősorban fehérjeexpresszióra használnak. Másrészt a DH5 Alpha egy genetikailag módosított kompetens E. coli sejt recA1 mutációval, amelyet elsősorban plazmid transzformációra használnak. Tehát ez a legfontosabb különbség a BL21 és a DH5 Alpha között. Ezenkívül a BL21 E. coli sejt nem tartalmaz recA1 mutációt, míg a DH5 Alpha E. coli sejt recA1 mutációt tartalmaz.
A következő infografika táblázatos formában sorolja fel a BL21 és a DH5 Alpha közötti különbségeket.
Összefoglaló – BL21 vs DH5 Alpha
A nem patogén E. coli törzseket tudósok genetikailag fejlesztették ki laboratóriumi expressziós vizsgálatok és klónozás céljából. A BL21 és a DH5 Alpha két genetikailag módosított E. coli sejt. A BL21-et elsősorban fehérjeexpressziós vizsgálatokhoz használják. Másrészt a DH5 Alpha-t elsősorban plazmidtranszformációs célokra használják. Így ez a BL21 és a DH5 Alpha közötti különbség összefoglalása.
