A legfontosabb különbség a Klenow és a T4 DNS polimeráz között az, hogy a Klenow fragment az E. coli DNS polimeráz 1 nagy fragmentuma, míg a T4 DNS polimeráz a T4 bakteriofág DNS polimeráz 1.
A DNS polimerázok olyan enzimek, amelyek katalizálják a DNS képződését azáltal, hogy egy már létező primer 3'-OH végéhez dezoxiribonukleotidokat adnak. Különböző típusú DNS-polimerázok léteznek. A molekuláris biológiában használt legtöbb DNS-polimeráz prokarióta DNS-polimeráz. A Klenow-fragmens és a T4 DNS-polimeráz kétféle DNS-polimeráz, amelyek prokarióta eredetűek. A Klenow-fragmens az a nagy fragmentum, amely az E. hasításából keletkezik.coli DNS-polimeráz 1 két fragmensét a bakteriális proteáz szubtilizin segítségével. A T4 DNS polimeráz a T4 bakteriofág DNS polimeráz 1. Mind a Klenow, mind a T4 DNS polimeráz 5′→3′ polimeráz és 3′→5′ exonukleáz aktivitással rendelkezik. Mindkettőből hiányzik az 5′→3′ exonukleáz aktivitás, így alkalmasabbak a molekuláris biológia számos alkalmazására.
Mi az a Klenow?
A Klenow-fragmens egy DNS-polimeráz, amely hasznos a molekuláris biológiában. Amikor az E. coli DNS-polimeráz 1 proteolitikus emésztésen megy keresztül bakteriális proteázzal, szubtilizinnel, két fragmentumot eredményez: az egyik egy nagy, a másik egy kis fragmentum. A Klenow-fragmens a nagy fragmentum, amelynek mérete 68 kDa. A Klenow-fragmens 5'→3' polimeráz és 3'→5' exonukleáz (korrekciós) aktivitással rendelkezik a DNS Pol I-ben. A Klenow-fragmens 3'→5' exonukleáz aktivitása elősegíti a helytelenül hozzáadott bázisok eltávolítását a polimerizáció előrehaladtával. A Klenow fragmentum nem tartalmaz 5′→3′ exonukleáz aktivitást, amit a teljes hosszúságú vagy ép E.coli DNS polimeráz 1. Előnyös, ha csak a polimerizációs aktivitásra van szükség önmagában. A Klenow-fragmenseket használják az 5’ túlnyúlások kitöltésére, próbák szintézisére, DNS szekvenálásra, kétszálú DNS szintézisére, cDNS második szál szintézisére és helyspecifikus mutagenezisre.
01. ábra: Klenow-töredék
Bizonyos alkalmazásokban a Klenow-fragmens 3′→5′ exonukleáz aktivitása szintén nemkívánatossá válik. Eltávolítható, ha mutációt viszünk be a Klenow-fragmenst kódoló génbe. A kapott Klenow-fragmentum exo-Klenow-fragmentumként ismert. Ezért az exo-Klenow fragmens csak az E. coli polimeráz 1 5′→3′ polimeráz aktivitásával rendelkezik.
Mi az a T4 DNS-polimeráz?
A T4 DNS polimeráz egy DNS polimeráz, amely katalizálja a DNS szintézisét. Ez a Bacteriophage T4 által kódolt fehérje. Szerkezetileg a T4 DNS polimeráz egy 898 aminosavból álló fehérje (molekulatömege 103,6 kDa). A szintézis katalizálásához sablonra és primerre van szükség.
02. ábra: T4 DNS-polimeráz
A Klenow-fragmenshez hasonlóan a T4 DNS-polimeráz 5′→3′ polimeráz és 3′→5′ exonukleáz aktivitással is rendelkezik. Ráadásul hiányzik belőle az 5′→3′ exonukleáz aktivitás sem. A T4 DNS-polimeráz hasznos a DNS-fragmensek 5'-kiálló végeinek kitöltésében. Gyakran használják a kettős szálú DNS 5'-végű vagy 3'-végű jelölésére is. A T4 DNS polimerázt gyakran használják tompa klónozáshoz. A T4 DNS polimeráz 3′→5′ exonukleáz (korrekciós) aktivitása erősebb (több mint 200-szor), mint a Klenow-fragmensé. A legfontosabb, hogy a T4 DNS polimeráz nagy processzivitással rendelkezik (400 nukleotid másodpercenként).
Mi a hasonlóság Klenow és a T4 DNS-polimeráz között?
- Klenow és T4 DNS polimeráz két prokarióta polimeráz.
- Mindkét polimeráz 5′→3′ polimeráz és 3′→5′ exonukleáz aktivitással rendelkezik.
- Nem mutatnak 5′→3′ exonukleáz aktivitást.
- Mindkét enzimhez templátra és primerre van szükség a DNS szintézisének katalizálásához.
- Ezek az enzimek hővel inaktiválhatók 75 °C-on 0
Mi a különbség a Klenow és a T4 DNS-polimeráz között?
A legfontosabb különbség a Klenow és a T4 DNS polimeráz között az egyes enzimek eredete. A Klenow-fragmens egy baktériumból, míg a T4 DNS-polimeráz egy bakteriofágból származik, amely vírus. A T4 DNS-polimeráz nagy processzivitással rendelkezik, mint a Klenow-fragmens. Ezenkívül a T4 DNS-polimeráz erős lektori aktivitással rendelkezik, mint a Klenow-fragmens. Tehát ez egy másik különbség a Klenow és a T4 DNS polimeráz között.
Az alábbi infografika táblázatos formában sorolja fel a Klenow és a T4 DNS polimeráz közötti különbségeket.
Összefoglaló – Klenow kontra T4 DNS-polimeráz
A Klenow-fragmens az E. coli DNS-polimeráz 1 nagy fragmentuma. Csak 5′→3′ polimeráz és 3′→5′ exonukleáz aktivitással rendelkezik. Hiányzik belőle az ép E. coli DNS pol 1 5′→3′ exonukleáz aktivitása. Ezért a Klenow-fragmens bakteriális polimeráz. Másrészt a T4 DNS polimeráz a T4 bakteriofág által kódolt polimeráz. A Klenow-fragmenshez hasonlóan 5′→3′ polimeráz és 3′→5′ exonukleáz aktivitást is tartalmaz, és hiányzik belőle az 5′→3′ exonukleáz aktivitás. A T4 DNS polimeráz azonban magas processzivitással és magas lektori aktivitással rendelkezik, mint a Klenow-fragmens. Tehát ez a legfontosabb különbség a Klenow és a T4 DNS polimeráz között.
