A legfontosabb különbség a Klenow-fragmens és a DNS-polimeráz 1 között az, hogy a Klenow-fragmens a DNS-polimeráz 1 nagy része, amelyből hiányzik az 5′-3′ exonukleáz aktivitás, míg a DNS-polimeráz egy E. coli enzim, amely mindhárommal rendelkezik. domének, beleértve az 5′-3′ exonukleáz aktivitást.
A DNS-polimeráz az egyik legfontosabb enzim, amely részt vesz a DNS-replikációban élő szervezetekben. Az eukariótákban és prokariótákban a DNS-polimeráz enzim különböző formái találhatók meg méretük és alakjuk alapján. A DNS-polimeráz 1, 2 és 3 csak prokarióta szervezetekben található meg, és különböző szerepet játszanak a DNS-replikációban. A DNS-polimeráz 1-nek három doménje van 5′-3′ polimeráz, 3′-5′ exonukleáz aktivitással és 5′-3′ exonukleáz aktivitással. A Klenow-fragmens a DNS-polimeráz 1 proteolitikus terméke. Rendelkezik az intakt DNS-polimeráz 1-hez képest 5-3'-polimeráz- és 3'-5'-exonukleáz-aktivitással, de hiányzik belőle az 5-3'-exonukleáz-aktivitás.
Mi az a Klenow Fragment?
A Klenow-fragmens a DNS-polimeráz 1 nagy része. A DNS-polimeráz 1-től eltérően az 5'-3' exonukleáz aktivitás nem látható a Klenow-fragmensben, mivel hiányzik az 5'-3'-es előremenő exonukleáz domén. A Klenow-fragmenseket a DNS-polimeráz 1 szubtilizin nevű proteázzal történő emésztésével állítják elő, amely egy fehérjeemésztő enzim. Egyes alkalmazásokban a Klenow-fragmens 3′-5′ exonukleáz aktivitása nemkívánatossá válik. Eltávolítható a Klenow-fragmenst kódoló gén mutációjának bevitelével. Az így létrejövő enzimet, amely csak az 5′-3′ polimeráz aktivitással rendelkezik, exo-Klenow-fragmensként ismerjük. Morfológiailag a Klenow-töredék az emberi jobb kézre hasonlít. N-terminális 3'-5' exonukleáz doménje és C-terminális polimeráz doménje van, amelyet körülbelül 30 A választ el.
01. ábra: Klenow-fragmens és DNS-polimeráz 1
Klenow fragmentum a molekuláris biológiai technikák fontos eszköze. A Klenow-töredékeknek többféle felhasználása is van. Rendkívül fontosak a tompa végű klónozásban, hogy tompa fragmenseket hozzanak létre. A Klenow-töredékek eltávolíthatják a 3′-os túlnyúlásokat, vagy kitölthetik az 5′-es túlnyúlásokat, hogy tompa végeket képezzenek. Ezenkívül a Klenow-fragmenseket egyszálú kettős szálú DNS szintetizálására használják. Ezenkívül radioaktívan jelölt próbák előállítására használják az 5'-3' DNS-függő DNS polimeráz aktivitás felhasználásával.
Mi az a DNS-polimeráz 1?
A DNS polimeráz 1 (Pol 1) a prokariótákban található enzim, amely a bakteriális DNS replikációjához szükséges. Ez az első típusú DNS-polimeráz, amelyet Arthur Kornberg fedezett fel 1956-ban. A Pol 1 a legnagyobb mennyiségben előforduló polimeráz az E. coliban. A polA gén kódolja, és 928 aminosavból áll. Három tartományból áll. Mindhárom tartomány különböző funkciókat lát el. Két domén 5′-3′ exonukleáz aktivitást és 3′-5′ exonukleáz aktivitást fejt ki. A Pol 1 ezen aktivitása miatt népszerű DNS-javító enzimként, nem pedig DNS-replikációként. A harmadik domén képes többszörös polimerizációt katalizálni (5′-től 3′-ig) a templát DNS felszabadulását megelőzően, és összekapcsolja az Okazaki-fragmenseket az új DNS kitöltésével és az RNS primerek eltávolításával.
02. ábra: DNS-polimeráz
Az E Coli-ból izolált Pol 1-et széles körben használták molekuláris alkalmazásokban. A Taq polimeráz felfedezése után azonban felváltotta az E Coli Pol 1-et a PCR technológiában. A Taq polimeráz egyfajta hőstabil DNS polimeráz, amely a Pol 1-hez tartozik.
Mi a hasonlóság a Klenow-fragmentum és a DNS-polimeráz 1 között?
- Klenow fragmentum a DNS polimeráz 1 nagy része.
- 5–3′ DNS-függő DNS-polimeráz aktivitással és 3–5′ exonukleáz aktivitással rendelkeznek, amelyek közvetítik a korrektúrát.
- Többféle célra használják őket.
Mi a különbség a Klenow-fragment és a DNS-polimeráz 1 között?
A legfontosabb különbség a Klenow-fragmens és a DNS-polimeráz 1 között az, hogy a Klenow-fragmensnek nincs 5'-3' exonukleáz aktivitása, míg a DNS-polimeráz 1-nek 5'-3' exonukleáz aktivitása van. Ezért a Klenow-fragmensnek két doménje van, míg a DNS-polimeráz 1-nek mindhárom doménje van.
Az alábbi infografika további részleteket mutat be a Klenow-fragmens és a DNS-polimeráz 1 közötti különbségről.
Összefoglaló – Klenow-fragment vs DNS-polimeráz 1
A DNS polimeráz 1 egy E. coli enzim, amelynek három doménje van: 5'-3' polimerizációs domén, 3'-5' exonukleáz domén és 5'-3' exonukleáz domén. A Klenow-fragmens a DNS-polimeráz nagy része. Hiányzik belőle a DNS-polimeráz 1 egy doménje, ami az 5′-3′ exonukleáz domén. A legfontosabb különbség a Klenow-fragmens és a DNS-polimeráz 1 között az, hogy a Klenow-fragmensek nem rendelkeznek 5'-3' exonukleáz doménnel, míg a DNS-polimeráz 1-nek 5'-3' exonukleáz doménje van.
