A legfontosabb különbség az FPLC és a HPLC között az, hogy az FPLC egy olyan folyadékkromatográfia, amely nagy biomolekulákat, például fehérjéket, nukleotidokat és peptideket tisztít, míg a HPLC egy olyan folyadékkromatográfia, amely kis molekulatömegű vegyületeket választ el.
A folyadékkromatográfia egy olyan technika, amelyet a minták egyedi komponensekre történő szétválasztására használnak. Ez az elválasztás a specifikus minták és a mozgó és állófázisok kölcsönhatása miatt következik be. A mintán belüli komponenseket a folyadékkromatográfiás eljárás során az egyes komponensek mozgófázishoz való affinitása alapján választják el. Ahogy a mozgófázis és a minta áthalad egy oszlopon, a minta komponensei elkezdenek szétválni UV-VIS spektroszkópiával detektálható sávokra. Ezért az FPLC és a HPLC kétféle folyadékkromatográfiás technika.
Mi az FPLC?
Az FPLC egy olyan folyadékkromatográfia, amely nagy biomolekulákat, például fehérjéket, nukleotidokat és peptideket tisztít meg. A gyors protein-folyadékkromatográfiát (FPLC) először a Pharmacia cég fejlesztette ki és hozta forgalomba Svédországban 1982-ben. Gyakran használják fehérjekeverékek elemzésére vagy tisztítására. Ez a mintakomponensek mozgó folyadékkal (mozgó fázis) és porózus szilárd anyaggal (álló fázis) való affinitásának elve alapján történik. Az FPLC-ben a mobil fázis egy puffer, az állófázis pedig egy gyöngyökből álló gyanta. Általában térhálós agarózból áll, hengeres üveg- vagy műanyagoszlopba csomagolva.
01. ábra: FLPC (Fast Protein Liquid Chromatography) készülék
Az FLPC stratégia legtöbbjében ioncserélő gyantát használnak. Ezért a kérdéses fehérje töltéskölcsönhatás révén kötődik a gyantához. Az FLPC technika két puffert is használ: az 1. puffert (a futtató puffer) és a 2. puffert (az elúciós puffer). Kezdetben, amikor a puffer és a minta keverék átfut az oszlopon, a keverékben lévő érdekes fehérje töltéskölcsönhatás révén kötődik a gyantához. De a kérdéses fehérje disszociálódik, és visszatér az elúciós pufferben lévő oldatba, amikor az elúciós puffer a folyamat végén átfut az oszlopon. Később az oldat (a kérdéses fehérjét tartalmazó eluens) két detektoron halad át, amelyek a sókoncentrációt és a fehérjekoncentrációt mérik. Amint az egyes fehérjék eluálódnak, „csúcsként” jelennek meg a detektálás során, és összegyűjthetők további felhasználáshoz.
Mi az a HPLC?
A HPLC egy olyan folyadékkromatográfia, amely kis molekulatömegű vegyületeket választ el. 1969-ben az első HPLC-t a Waters Corporation (USA) gyártotta kereskedelmi forgalomba. A nagy teljesítményű folyadékkromatográfiában (HPLC) egy oldószerben (mozgó fázisban) lévő mintaelegyet (analitot) nagy nyomáson átszivattyúznak egy kromatográfiás töltetanyaggal (stacionárius fázis) tartalmazó oszlopon. A minta keveréket mozgó hélium vagy nitrogén hordozógázáram szállítja.
02. ábra: HPLC (nagy teljesítményű folyadékkromatográfia)
A mintakeverék azon komponensei, amelyek a legkevesebb kölcsönhatásba lépnek az állófázissal vagy a legtöbb kölcsönhatást a mozgó fázissal, gyorsabban lépnek ki az oszlopból. Másrészt a mintakeverék azon komponensei, amelyek a legtöbb kölcsönhatásba lépnek az állófázissal vagy a legkevesebb kölcsönhatást a mozgófázissal, lassabban lépnek ki az oszlopból. A fenti kölcsönhatási elv alapján a minta keverék komponensei szétválaszthatók. Ezenkívül a műszerdetektor azonosítja a mintakeverék minden egyes komponensét, amely kilép az oszlopból. A HPLC-t a környezeti és biológiai minták vizsgálatára használják ismert vegyületek, például gyógyszerek, toxinok vagy peszticidek jelenlétére vagy hiányára. Különböző iparágakban használják, mint például a gyógyszeripar, a környezetvédelem, a kriminalisztika és a vegyipar.
Mi a hasonlóság az FPLC és a HPLC között?
- Az FPLC és a HPLC a folyadékkromatográfia típusai.
- Mindkettő biológiai minták elkülönítésére és azonosítására szolgál.
- Van egy folyékony mozgófázis és egy szilárd állófázis.
- Mindkét technika egy oszlopot használ a mintán való áthaladáshoz.
- Ezek a technikák szivattyúkat, detektorokat, szelepeket és szoftvereket használnak a minták szétválasztására és kimutatására.
Mi a különbség az FPLC és a HPLC között?
Az FPLC a folyadékkromatográfia egy fajtája, amelyet nagy biomolekulák, például fehérjék, nukleotidok és peptidek tisztítására használnak. A HPLC egyfajta folyadékkromatográfia, amelyet kis molekulatömegű vegyületek elválasztására használnak. Tehát ez a legfontosabb különbség az FPLC és a HPLC között. Ezen túlmenően az FPLC pH- és vezetőképesség-monitorokat, valamint kutakat használ frakciógyűjtőként. Ezzel szemben a HPLC nem használ pH- és vezetőképesség-monitorokat és frakciógyűjtőket.
Az alábbi infografika további különbségeket sorol fel az FPLC és a HPLC között táblázatos formában.
Összefoglaló – FPLC vs HPLC
A kromatográfia egy laboratóriumi analitikai technika, amelyet a keverék összetevőinek elválasztására használnak. Több típusra oszlik, például oszlopkromatográfiára, gázkromatográfiára, folyadékkromatográfiára, ioncserélő kromatográfiára stb. Az FPLC és a HPLC kétféle folyadékkromatográfiai technika. Az FPLC egyfajta folyadékkromatográfia, amelyet nagy biomolekulák, például fehérjék, nukleotidok és peptidek tisztítására használnak. Másrészt a HPLC egyfajta folyadékkromatográfia, amelyet kis molekulatömegű vegyületek elválasztására használnak. Így ez az összefoglaló arról, hogy mi a különbség az FPLC és a HPLC között.
