A legfontosabb különbség az RP HPLC és a HIC között, hogy az RP HPLC polárisabb mozgó fázist és kevésbé poláris állófázist használ. Míg a HIC egy hidrofób állófázist használ, amely lehetővé teszi, hogy a hidrofób molekulák hozzákapcsolódjanak.
A kromatográfia egy olyan analitikai technika, amely segít a keverék összetevőire történő szétválasztásában. Először is fel kell oldanunk az elválasztandó mintát oldattá. Ezt az oldat-anyag keveréket mozgófázisnak nevezzük. Ezután a mozgó fázist egy másik anyagon vezetik át, amelyet állófázisnak neveznek. Az állófázis határozza meg a komponensek elválasztását. Az elválasztás az anyagnak a mozgófázis és az állófázis közötti megoszlása miatt következik be.
Mi az RP HPLC?
Az RP HPLC kifejezés a fordított fázisú nagy teljesítményű folyadékkromatográfiát jelenti. Ez magában foglalja a keverék összetevőinek elválasztását a hidrofóbitás szerint. A mozgófázisban lévő hidrofób komponensek az állófázis immobilizált hidrofób ligandumaihoz kapcsolódnak, míg a hidrofil komponensek az állófázison keresztül eluálódnak anélkül, hogy az állófázis felületéhez kötődnének.
01. ábra: HPLC készülék
Sőt, ez a módszer jobban reprodukálható más kromatográfiás technikákhoz képest, és széleskörű alkalmazhatóságot is mutat. Ezért ezt a módszert használjuk a laboratóriumokban az összes HPLC-módszer több mint 75%-ánál. Legtöbbször víz vizes keverékét használjuk elegyedő poláris szerves oldószerrel mozgófázisként. Így ez biztosítja az oldatban lévő hidrofób komponensek rögzítését az állófázis felületéhez.
Mi az a HIC?
A HIC kifejezés a hidrofób interakciós kromatográfiát jelenti. Ez egyfajta fordított fázisú HPLC, és ezt a módszert főleg nagy biomolekulák, például fehérjék elválasztására használják. Ennél a módszernél vizes közeget kell használnunk a biomolekula mintájának elkészítéséhez. Ennek oka, hogy a szerves oldószerek a fehérjék denaturálódását okozhatják. Ezenkívül ez a technika nagy molekulák és az állófázis enyhén hidrofób felülete közötti kölcsönhatást használja. Továbbá magas sókoncentrációt kell használnunk a mintában, mert ez elősegíti a fehérje visszatartását a csomagoláson; ezt a folyamatot kisózásnak nevezik. A sókoncentráció fokozatos csökkentésével a biomolekulákat hidrofobicitásuk szerint külön-külön eluálhatjuk.
Ez a módszer általában az ioncserélő kromatográfiával ellentétes feltételeket alkalmazza. Ennél a technikánál először pufferoldatot kell átengednünk az oszlopon, hogy csökkentsük a mintában lévő oldott anyag szolvatációját. A fehérje hidrofób régióit szabaddá teszi. Ha azonban a molekula hidrofóbabb, kevesebb só szükséges a kötődés elősegítéséhez. Itt először a kevésbé hidrofób oldott anyagok eluálódnak, és a sókoncentráció változásának megfelelően a hidrofóbabb oldott anyagok utoljára.
Mi a különbség az RP HPLC és a HIC között?
A kromatográfia egy analitikai technika keverékben lévő komponensek elválasztására. Az RP HPLC és a HIC két speciális kromatográfiás technika. A legfontosabb különbség az RP HPLC és a HIC között az, hogy az RP HPLC polárisabb mozgó fázist és kevésbé poláris állófázist használ, míg a HIC hidrofób állófázist, amely lehetővé teszi a hidrofób molekulák hozzátapadását.
Az alábbi infografika összefoglalja az RP HPLC és a HIC közötti különbséget.
Összefoglaló – RP HPLC vs. HIC
A kromatográfia egy analitikai technika keverékben lévő komponensek elválasztására. Az RP HPLC és a HIC két speciális kromatográfiás technika. A legfontosabb különbség az RP HPLC és a HIC között az, hogy az RP HPLC polárisabb mozgófázist és kevésbé poláris állófázist használ, míg a HIC hidrofób állófázist, amely lehetővé teszi a hidrofób molekulák hozzákapcsolódását.
