Kiemelt különbség – egymásra rakódó gél vs elválasztó gél
Az SDS-PAGE technika magyarázatára a halmozott gél és az elválasztó gél kifejezések használatosak. Az SDS-PAGE vagy nátrium-dodecil-szulfát-poliakrilamid gélelektroforézis egy laboratóriumi technika, amelyet fehérjemolekulák molekulatömegük alapján történő elválasztására használnak. A technika mögött meghúzódó elmélet az, hogy a különböző molekulatömegű fehérjék eltérő migrációs sebességet mutatnak; az alacsony molekulatömegű molekulák gyorsabban, míg a nagy molekulatömegű molekulák lassan vándorolnak. A migráció közege egy gél. Kétféle gél létezik, amelyeket egymásra rakódó gélnek és elválasztó gélnek neveznek. A legfontosabb különbség az egymásra rakódó gél és az elválasztó gél között az, hogy a halmozott gél pH-ja 6,8, míg az elválasztó gél pH-ja 8,8.
Mi az a Stacking Gel?
A Stacking gél egy alacsony koncentrációjú poliakrilamid gél, amelyet SDS-PAGE technikával koncentráltabb rezolváló gél (elválasztó gél) tetejére helyeznek. A halmozódó gélt az elektroforézis felbontásának javítására használják. A felbontás növekszik az egymásra rakódó gél és a rezolváló gél koncentrációi közötti különbség miatt, amely hatással van a mintában lévő fehérjékre. Mivel a poliakrilamid koncentrációja a halmozott gélben alacsony, a pórusméret nagyobb. Ez is segít az elválasztás növelésében.
A halmozódó gél egy laza poliakrilamid gél, nagy pórusokkal, körülbelül 7% poliakrilamiddal. Ezek a pórusok nem jelentenek jelentős gátat a nagy fehérjemolekulák számára. Ezért ez a gél kis mértékben befolyásolja a fehérjék mobilitását. Ez a fehérjék mobilitása és mérete szerint való elválasztást teszi lehetővé azáltal, hogy két gél közé koncentrálják őket.
01. ábra: SDS-PAGE akrilamid gél
A halmozódó gél pH-ja 6,8. A pH-ja savasabb, mint a 2 pH-egységgel feloldó gélé. Ez a pH alacsonyabb ionerősséget jelent, ennélfogva nagyobb elektromos ellenállást. Ez kiváltja a fehérjék mobilitását, mint a gélben jelen lévő egyéb töltött részecskék.
Mi az elválasztó gél?
Az SDS-PAGEtechnique elválasztó gél vagy rezolváló gél egy erősen koncentrált poliakrilamid gél, amelyet alacsony koncentrációjú halmozódó gél tetejére helyeznek. Az elválasztó gél nagy mennyiségű (10%) poliakrilamidot tartalmaz. Ennek a gélnek a pH-értéke 8,8, ami magasabb pH-érték, mint az egymásra rakott gélé.
02. ábra: Gélelektroforézis készülék
Amikor a fehérjemolekulák elérik az elválasztó gélt, ezeknek a molekuláknak a migrációja lelassul, mivel az elválasztó gél egy nagy koncentrációjú, kis pórusméretű gél, amely jelentős gátat képezhet a fehérjemolekulák mozgásában.. Ez a lassítás lehetővé teszi, hogy a többi fehérje lassan vándorol, hogy felzárkózzon, ami keskeny, koncentrált sávot eredményez a két gél között.
Mi a kapcsolat az egymásra rakott gél és az elválasztó gél között?
A Stacking Gel és Separating Gel típusokat ugyanabban a készülékben használják
Mi a különbség a halmozódó gél és az elválasztó gél között?
Stacking Gel vs Separating Gel |
|
| A Stacking gél egy alacsony töménységű poliakrilamid gél, amelyet SDS-PAGE technikával koncentráltabb rezolváló gél (elválasztó gél) tetejére helyeznek. | Az SDS-PAGE technika elválasztó gélje vagy rezolváló gélje egy erősen koncentrált poliakrilamid gél, amelyet egy alacsony koncentrációjú halmozódó gél tetejére helyeznek. |
| Elhelyezés | |
| A halmozott gélt a feloldó (elválasztó) zselére helyezzük. | Elválasztó gélt helyezünk a gélelektroforézishez használt tartály aljára. |
| Koncentráció | |
| A halmozódó gél koncentrációja magas. | Az elválasztó gél koncentrációja alacsony. |
| Poliakrilamid tartalom | |
| Stacking gél körülbelül 7% poliakrilamidot tartalmaz. | Az elválasztó gél körülbelül 10% poliakrilamidot tartalmaz. |
| pH | |
| A halmozódó gél pH-ja 6,8. | Az elválasztó gél pH-ja 8,8. |
| Pórusméret | |
| Nagy pórusméretek vannak jelen a halmozódó gélben. | Kis pórusméretek vannak jelen az elválasztó gélben. |
| Felbontás | |
| A halmozott gél jobb felbontást biztosít. | Az elválasztó gél gyenge felbontást ad. |
Összefoglaló – Stacking Gel vs Separating Gel
A halmozott gél és az elválasztó gél kétféle poliakrilamid gél, amelyet a fehérjemolekulák jobb elválasztására használnak egy adott mintában. Az egymásra rakódó gél és az elválasztó gél közötti különbség az, hogy a halmozott gél pH-ja 6,8, míg az elválasztó gél pH-ja 8,8.
