Kulcskülönbség – Közvetlen vs közvetett ELISA
Az enzimhez kötött immunoassay (ELISA), más néven enzim immunoassay, egy szerológiai teszt, amely antitesteket mutat ki a vérben. Diagnosztikai eszközként alkalmazzák annak kiderítésére, hogy a páciens ki volt-e téve egy bizonyos típusú vírusnak vagy más fertőző ágensnek (antigénnek), és hogy a szervezet termelt-e antitesteket a fertőzés ellen. Az ELISA képes azonosítani a múltbeli és jelenlegi fertőzéseket is. Ezért az ELISA-t gyakran használják előszűrő vizsgálatként az orvosok a betegségek mélyreható elemzése előtt. Ezt a vizsgálatot a laboratóriumban a betegtől vérminta vételével lehet elvégezni. Kétféle ELISA teszt létezik: a közvetlen ELISA és az indirekt ELISA. A fő különbség a direkt és a közvetett ELISA között az, hogy a közvetett ELISA érzékenyebb, és másodlagos antitest hozzáadása szükséges, míg a közvetlen ELISA kevésbé érzékeny, és csak elsődleges antitestet használ.
Mi az a Direct ELISA?
Az ELISA egy betegségdiagnosztikai teszt, amelyet bizonyos antigének vagy antitestek vérben való kimutatására végeznek. Ez lemezes vizsgálatként történik. Könnyen vizsgálható enzimekhez kapcsolt antitesteket használ. Az antigének jelenléte a szérummintában enzimekhez kapcsolódó specifikus antitestekhez kötődik. Az utolsó lépésben egy specifikus szubsztrátot adunk hozzá, hogy reagáljon az enzimmel. Az enzim a szubsztrátot színes vagy jeltermelő termékké alakítja. A kémiai szubsztrát színváltozása felfedi egy adott antitest jelenlétét a szérummintában. A közvetlen ELISA teszt csak az enzimhez kapcsolódó elsődleges antitestet használ. Az antigénhez kötve gyorsan megváltoztatja a színét, jelezve a fertőző ágens jelenlétét a vérben. A jelek intenzitása azonban gyengébb a közvetlen ELISA-ban, mivel az epitópok az antigének megkötésére korlátozódnak. Ezért a közvetlen ELISA kevésbé érzékeny, mint a közvetett ELISA.
01. ábra: Közvetlen ELISA-teszt
Mi az a közvetett ELISA?
ELISA kétféle antitest felhasználásával végezhető el, nevezetesen; elsődleges antitest és másodlagos antitest. Az indirekt ELISA eszköz mindkét típusú antitestet használja a jelek felerősítésére a jobb észlelés érdekében. Az indirekt ELISA technikát a következőképpen hajtjuk végre.
- A lemezeket antigénekkel inkubáljuk, és mossuk, hogy megakadályozzuk a nem specifikus kötődést.
- Ezután hozzáadjuk az elsődleges antitesteket, és megmossuk.
- Enzimhez kötött másodlagos antitestet adunk hozzá és mossuk.
- Egy szubsztrátot adunk hozzá, és hagyjuk reagálni az enzimekkel.
- A rendszer észleli a jeleket, és azonosítja a specifikus antigén jelenlétét vagy hiányát a mintában.
Indirekt ELISA tesztben több másodlagos antitest is kötődhet egyetlen elsődleges antitesthez. A másodlagos antitestek könnyen vizsgálható enzimekhez kapcsolódnak. Ezért egy kötődés egynél több kölcsönhatás miatt erős jelet adhat. Ezért az indirekt ELISA érzékenyebb, mint a közvetlen ELISA. Az indirekt ELISA azonban nem specifikus jeleket adhat a másodlagos antitestek keresztreakciói miatt.
02. ábra: Közvetett ELISA-teszt
Mi a különbség a közvetlen és a közvetett ELISA között?
Közvetlen vs közvetett ELISA |
|
| A közvetlen ELISA kevésbé érzékeny, mint a közvetett ELISA. | A közvetett ELISA érzékenyebb. |
| Eltelt idő | |
| A közvetlen ELISA-teszt egy gyors folyamat. | A közvetett ELISA időigényes. |
| Antitestek használata | |
| Csak egy típusú antitestet (elsődleges antitesteket) használnak a közvetlen ELISA-ban. | Primer és másodlagos antitesteket használnak a közvetett ELISA-hoz. |
| Kapcsolat enzimekkel | |
| Az elsődleges antitestek enzimekhez kapcsolódnak. | A másodlagos antitestek enzimekhez kapcsolódnak. |
| A második antitestek keresztreaktivitása | |
| A közvetlen ELISA kiküszöböli a második antitestek keresztreaktivitását. | A közvetett ELISA-t befolyásolja a második antitestek keresztreaktivitása. |
| Jelek | |
| A jelek gyengék a közvetett ELISA-hoz képest. | A jelek az indirekt ELISA-ban felerősödnek. Ezért könnyű felismerni. |
Összefoglaló – Közvetlen vs közvetett ELISA
Az ELISA egy biokémiai módszer, amelyet főleg az immunológiában használnak egy antitest vagy antigén jelenlétének kimutatására a páciens vérmintájában. Két eljárással hajtható végre, amelyek direkt vagy indirekt ELISA néven ismertek. A közvetlen ELISA teszt csak primer antitesteket használ az antigén kimutatására, míg a közvetett ELISA mind az elsődleges, mind a másodlagos antitesteket. A direkt ELISA-ban az elsődleges antitesteket, míg az indirekt ELISA-ban a másodlagos antitesteket jelölik. Ez a különbség a közvetlen és a közvetett ELISA között.
